Anticorpo Policlonale di Coniglio NFKB1 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P19838

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NFKB1

• NFKB1 codifica per il precursore p105, che viene processato cotraslazionalmente dal proteasoma per generare la subunità attiva p50 (PubMed:1423592). Riferimenti correlati: PMID:1423592
• La subunità p50 forma dimeri funzionali di NF-kB associandosi ad altri membri della famiglia Rel, in particolare l'eterodimero p65-p50, che agisce come un potente attivatore trascrizionale (PubMed:1740106, PubMed:7830764). Riferimenti correlati: PMID:1740106, PMID:7830764
• I dimeri di NF-kB si legano specificamente alla sequenza consenso del DNA kappa-B (5'-GGRNNYYCC-3') localizzata nelle regioni enhancer di geni che governano le risposte immunitarie, le reazioni di fase acuta, l'infiammazione e la sopravvivenza cellulare.
• Nelle cellule non stimolate, NF-kB è sequestrato nel citoplasma dalle proteine inibitrici I-kB; in seguito all'attivazione da parte di stimoli diversi, I-kB viene fosforilata e degradata, liberando NF-kB che può entrare nel nucleo e regolare l'espressione dei geni bersaglio.
• La forma a lunghezza intera p105 funge anche da inibitore simile a I-kB, trattenendo le proteine NF-kB associate nel citoplasma e modulando la segnalazione MAPK reprimendo MAP3K8 fino a quando la sua degradazione non rilascia MAP3K8 attiva.
• Le principali modificazioni post-traduzionali di NFKB1 includono fosforilazione, acetilazione, ubiquitinazione e S-nitrosilazione, che modulano finemente la sua attività trascrizionale e stabilità.
• La localizzazione subcellulare è principalmente citoplasmatica nelle cellule a riposo e nucleare in seguito all'attivazione del pathway.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo, generato contro un peptide all'interno della regione N-terminale comune sia a p105 che a p50, dovrebbe rilevare entrambe le forme; in WB, aspettarsi bande a ~105 kDa (p105) e ~50 kDa (p50) a seconda del tipo cellulare e della stimolazione.
• Per IHC-P e IF/ICC, le condizioni di recupero dell'antigene e i metodi di fissazione potrebbero richiedere ottimizzazione; considerare la possibilità di testare sia pattern di colorazione citoplasmatica che nucleare.
• Verificare la specificità dell'anticorpo utilizzando controlli appropriati, come linee cellulari con knockdown mediato da siRNA o knockout.
• Per applicazioni ELISA, confermare che l'anticorpo riconosca le conformazioni proteiche native nella propria matrice campione.
• Regolare empiricamente le condizioni di blocco e diluizione dell'anticorpo per il proprio sistema sperimentale.

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