NLRP3 Coniglio mAb - Q8R4B8

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NLRP3

• NLRP3, noto anche come criopirina, è un membro della famiglia di sensori intracellulari NLRP (contenenti domini NACHT, LRR e PYD) che si assembla nell'infalmasoma NLRP3. Nomi alternativi includono NALP3, CIAS1, Pypaf1, Mmig1 e altri.
• Come componente sensore, NLRP3 rileva un'ampia gamma di segnali associati a patogeni e danni (es. ATP, nigericina, cristalli, amiloide-β), innescando la formazione dell'infalmasoma. Questo porta all'attivazione della caspasi-1, che cliva pro-IL-1β e pro-IL-18 nelle loro forme attive e induce la piroptosi attraverso gasdermina-D. Riferimenti correlati: PMID:19362020, PMID:23582325, PMID:26642356
• L'attivazione richiede l'efflusso di K⁺ e spesso coinvolge la ricollocazione alla rete trans-Golgi o ai siti di contatto mitocondri-RE. L'attività ATPasica di NLRP3 è necessaria per l'assemblaggio dell'infalmasoma. Riferimenti correlati: PMID:34861190
• NLRP3 funziona anche indipendentemente come fattore di trascrizione che promuove la differenziazione Th2 legandosi al promotore dell'IL-4 e regolando l'espressione delle citochine Th2, influenzando così l'asma allergico e la crescita tumorale. Riferimenti correlati: PMID:26098997
• La localizzazione subcellulare è dinamica: in condizioni di riposo, NLRP3 risiede nel citosol e nel reticolo endoplasmatico; dopo l'attivazione, si sposta al centro di organizzazione dei microtubuli, al Golgi e viene secreto. Può essere trovato anche nel nucleo.
• Alta espressione nei leucociti del sangue periferico, inclusi macrofagi e linfociti Th2, coerente con il suo ruolo nell'immunità innata e adattativa. Riferimenti correlati: PMID:15302403, PMID:26098997
• Le modificazioni post-traduzionali includono fosforilazione, palmitoilazione e ubiquitinazione, che regolano la sua attività e stabilità. Parole chiave: Attivatore, Legame ATP, Infalmasoma, Ripetizione ricca di leucina, Proteoma di riferimento, Coniugazione Ubl.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo è stato prodotto contro gli amminoacidi 1–150 di NLRP3 di topo, suggerendo il riconoscimento del dominio PYD N-terminale. Può rilevare sia la forma a lunghezza intera che quella clivata.
• Per il Western blotting (proteina da 118 kDa), utilizzare un gel SDS-PAGE al 6–8% e un trasferimento prolungato (es. 2 ore a 100 V) per proteine ad alto peso molecolare. Includere un lisato di controllo positivo da macrofagi di topo o cellule THP-1 trattate con LPS e nigericina.
• Per l'immunofluorescenza, permeabilizzare le cellule con Triton X-100 allo 0,1% per accedere a NLRP3 citosolico e associato agli organelli. Eseguire una colorazione concomitante con marcatori di organelli per studiare la traslocazione dipendente dall'attivazione.
• Nell'immunoprecipitazione, utilizzare 1–2 µg di anticorpo per 500 µg di lisato; la proteina potrebbe richiedere cross-linking o lisi accurata per mantenere i complessi dell'infalmasoma.
• Convalidare tutte le applicazioni con appropriati sistemi di tessuto o cellulare di topo, poiché la reattività incrociata è riportata solo per il topo.

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