Anticorpo policlonale di coniglio anti-NLRP3 per WB, IF/ICC, ELISA - Q8R4B8

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di NLRP3

• NLRP3 (proteina 3 contenente i domini NACHT, LRR e PYD, nota anche come criopirina) è un sensore intracellulare che costituisce la componente centrale dell'inflammasoma NLRP3, il quale media l'attivazione in risposta a difetti dell'integrità della membrana, portando alla secrezione di IL1B e IL18 e alla piroptosi. Riferimenti correlati: PMID:19362020, PMID:23582325, PMID:26642356

• NLRP3 avvia la formazione di un complesso inflammasomiale polimerico con CASP1 e PYCARD/ASC, che attiva la caspasi-1 per scindere pro-IL1B, pro-IL18 e gasdermina-D (GSDMD), determinando il rilascio di citochine e la morte cellulare piroptotica. Riferimenti correlati: PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:19362020, PMID:16546100, PMID:17008311, PMID:26642356

• Diversi stimoli associati a patogeni e danni, tra cui ATP extracellulare, nigericina, cristalli (urato, colesterolo), beta-amiloide e particolato (amianto, silice), attivano NLRP3, convergendo quasi tutti sull'efflusso intracellulare di K+. Riferimenti correlati: PMID:16407888, PMID:16407889, PMID:16407890, PMID:23809161

• L'attivazione dell'inflammasoma NLRP3 è inoltre necessaria per la secrezione di HMGB1 e regola una risposta omeostatica alla guarigione delle ferite che dirige la migrazione dei neutrofili verso i siti necrotici senza danneggiare i tessuti sani. Riferimenti correlati: PMID:22801494, PMID:20947763

• In seguito all'attivazione, NLRP3 viene trasportata al centro di organizzazione dei microtubuli (MTOC), quindi alle vescicole disperse della rete trans-Golgi (dTGN), dove si lega al fosfatidilinositolo 4-fosfato (PtdIns4P) e assembla inflammasomi attivi, un processo reso possibile da NEK7. Riferimenti correlati: PMID:26814970, PMID:34615873, PMID:34861190, PMID:30487600

• NLRP3 è altamente espressa nei leucociti del sangue periferico (linfociti Th2 e macrofagi) e a bassi livelli negli osteoblasti, in accordo con il suo ruolo immunologico e infiammatorio. Riferimenti correlati: PMID:15302403, PMID:16546100, PMID:26098997, PMID:28847925, PMID:17907925

• Indipendentemente dalla sua funzione di impalcatura dell'inflammasoma, NLRP3 agisce come regolatore trascrizionale nelle cellule Th2, legandosi al DNA e modulando l'espressione di IL4, IL5, IL13 e di altri geni fondamentali per la differenziazione Th2 e l'infiammazione allergica. Riferimenti correlati: PMID:26098997

• NLRP3 possiede un'attività ATPasica intrinseca ed è regolata da diverse modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, palmitoilazione e ubiquitinazione, che controllano la sua soglia di attivazione e le sue interazioni. Riferimenti correlati: PMID:34861190

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 1–93 di NLRP3 murino, una regione contenente il dominio pirinico (PYD). Considerare che l'anticorpo può rilevare sia la proteina a lunghezza intera sia frammenti contenenti PYD; verificare la specificità nel proprio sistema modello.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è di circa 118 kDa; tuttavia, le modifiche post-traduzionali possono determinare bande aggiuntive. Utilizzare controlli positivi e negativi appropriati (ad esempio, lisati di macrofagi stimolati con LPS+ATP) e ottimizzare le percentuali di gel per le proteine ad alto peso molecolare.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), NLRP3 può presentare una colorazione puntiforme o diffusa a seconda dello stato di attivazione. Le condizioni di fissazione e permeabilizzazione devono essere ottimizzate per preservarne la localizzazione nativa.
• Per le applicazioni ELISA, può essere necessario abbinare un altro anticorpo specifico per NLRP3 nei formati sandwich; la natura policlonale può essere vantaggiosa per la cattura o la rilevazione.

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