Anticorpo Policlonale NLRP3 Coniglio per WB, IF/ICC, ELISA - Q96P20

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NLRP3

• NLRP3 (proteina 3 contenente domini NACHT, LRR e PYD), nota anche come criopirina, CIAS1 o NALP3, è un membro della famiglia dei recettori simili a NOD (NLR), caratterizzata da un dominio pirina (PYD) N-terminale, un dominio NACHT centrale e ripetizioni ricche di leucina (LRR) C-terminali.
• Come componente sensore dell'inflammasoma NLRP3, orchestra il reclutamento di ASC (PYCARD) e della procaspasi-1, portando all'attivazione della caspasi-1, che scinde la pro-IL-1β e la pro-IL-18 in citochine mature e innesca la piroptosi mediata dalla gasdermina-D.
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• NLRP3 risponde a un ampio spettro di stimoli, inclusi ATP extracellulare, nigericina, cristalli di urato monosodico, cristalli di colesterolo, fibrille di amiloide-β e particolati ambientali; questi segnali inducono un efflusso di potassio e una perturbazione della membrana, con conseguente traslocazione di NLRP3 al centro organizzatore dei microtubuli (MTOC) e alla rete trans-Golgi dispersa (dTGN), dove si lega al fosfatidilinositolo 4-fosfato (PtdIns4P) tramite la sua regione polibasica, facilitando l'assemblaggio dell'inflammasoma.
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• Espresso prevalentemente nei macrofagi, e rilevato anche nelle cellule dendritiche, cellule B e T, granulociti, cellule epiteliali polmonari, condrociti ed epiteli squamosi stratificati (orale, esofageo, ectocervicale e vescicale).
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• Le mutazioni gain-of-function in NLRP3 sono responsabili delle sindromi periodiche associate alla criopirina (CAPS), che comprendono la sindrome autoinfiammatoria familiare da freddo, la sindrome di Muckle-Wells e la CINCA/NOMID, e sono associate a sordità e amiloidosi sistemica.
• La localizzazione subcellulare include il citosol, il complesso inflammasoma, la membrana dell'apparato di Golgi, il reticolo endoplasmatico, i mitocondri, e può essere secreta o trovata nel nucleo in determinate condizioni.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 100–210, che si trovano all'interno del dominio PYD di NLRP3 umano; questa regione è relativamente conservata tra le specie, in linea con la reattività crociata osservata con gli ortotopi di topo e ratto.
• Nel Western blot ci si aspetta di vedere una singola banda a circa 118 kDa nei lisati cellulari totali di macrofagi o altre cellule che esprimono NLRP3.
• Come controlli positivi, considerare l'uso di cellule THP‑1 umane trattate con LPS o macrofagi derivati dal midollo osseo di topo, noti per aumentare l'espressione di NLRP3.
• In IF/ICC, le condizioni di permeabilizzazione e fissazione potrebbero richiedere ottimizzazione; includere campioni non stimolati vs. stimolati può aiutare a visualizzare la formazione delle "speck" dell'inflammasoma.
• Convalidare le prestazioni dell'anticorpo nel vostro specifico tipo di campione e applicazione, poiché la natura policlonale può portare a variabilità tra i lotti; sono raccomandati test pilota con controlli appropriati.

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