Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Orexina B per WB, IHC, IF/ICC, ELISA - O43612

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione dell'Orexina B/Ipocretina-2

• Il gene HCRT codifica il precursore della prepro-orexina, che viene processato proteoliticamente per produrre due neuropeptidi maturi: orexina-A (ipocretina-1) e orexina-B (ipocretina-2).
• L'orexina-B/ipocretina-2 è un agonista selettivo del recettore dell'orexina HCRTR2/OX2R, mentre l'orexina-A si lega sia a HCRTR1 sia a HCRTR2 con elevata affinità.
• I neuroni dell'orexina proiettano ampiamente dall'ipotalamo laterale e i peptidi sono immagazzinati in vescicole citoplasmatiche nelle terminazioni sinaptiche; a livello subcellulare, il precursore si localizza nel reticolo endoplasmatico rugoso.
• La segnalazione centrale dell'orexina regola il comportamento alimentare, il metabolismo energetico e i cicli sonno-veglia; la sua disfunzione è associata a disturbi del sonno come la narcolessia (parola chiave UniProt: variante associata a malattia).
• L'orexina-B modula la secrezione dell'ormone luteinizzante ipofisario in modo dipendente dagli steroidi ovarici (per similarità).
• Il precursore è soggetto a modifiche post-traduzionali, tra cui amidazione, scissione in corrispondenza di residui basici appaiati e formazione di ponti disolfuro, che generano peptidi bioattivi.
• È espresso abbondantemente nel nucleo subtalamico; non è rilevabile nel cuore, nella placenta, nei polmoni, nel fegato, nel muscolo scheletrico, nei reni e nel pancreas (l'ipotalamo non è stato analizzato nello studio di riferimento).

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è una proteina ricombinante dell'Orexina B/Ipocretina-2 umana; la specificità dell'anticorpo deve essere convalidata nel sistema di campioni pertinente.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto del precursore è di 13 kDa, ma i peptidi maturi sono più piccoli; si consiglia di ottimizzare le condizioni di rilevazione e di includere controlli appropriati.
• Per l'IHC-P, i metodi di recupero antigenico possono richiedere un'ottimizzazione empirica; si raccomandano tessuti di controllo positivo, come il nucleo subtalamico.
• Per IF/ICC, gli studi di co-localizzazione con marcatori sinaptici possono contribuire a confermare la localizzazione; la colorazione aspecifica deve essere valutata mediante controlli isotipici.

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