PAK1 Rabbit mAb per WB, IF/ICC, ELISA - Q13153

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PAK1

• Codificato dal gene PAK1, PAK1 (p21-activated kinase 1) è una chinasi proteica serina/treonina nota anche come alpha-PAK, p65-PAK e PAKalpha. Appartiene alla famiglia di chinasi PAK che agiscono come effettori per le piccole GTPasi CDC42 e RAC1.
• PAK1 funge da nodo critico di segnalazione a valle delle integrine e dei recettori tirosin chinasi, regolando diversi processi cellulari tra cui la dinamica del citoscheletro, l'adesione cellulare, la migrazione, la proliferazione, l'apoptosi, la mitosi e il trasporto mediato da vescicole (PubMed:10551809, PubMed:11896197, PubMed:12876277). Riferimenti correlati: PMID:10551809 PMID:11896197 PMID:12876277
• All'attivazione da parte di CDC42 e RAC1 legate a GTP, PAK1 collega le GTPasi della famiglia Rho alla via della chinasi MAP JNK e fosforila bersagli a valle come MAP2K1, RAF1 e LIMK1, influenzando così l'espressione genica e il rimodellamento dell'actina (PubMed:8805275, PubMed:9528787, PubMed:11733498, PubMed:23633677). Riferimenti correlati: PMID:8805275 PMID:9528787 PMID:11733498 PMID:23633677
• PAK1 si localizza in più compartimenti subcellulari tra cui il citoplasma, le adesion focali, le lamellipodia, i ruffles di membrana, le invadopodia, il nucleoplasma e i centrosomi, coerente con i suoi ruoli pleiotropici nella motilità cellulare, nell'adesione e nella segnalazione nucleare.
• La chinasi svolge un ruolo nella riorganizzazione del citoscheletro di actina e dei complessi di adesione focale, fosforilando direttamente regolatori come la catena leggera della miosina e la cofilina per modulare la contrattilità actomiosinica e la forma cellulare (PubMed:9032240, PubMed:9395435). Riferimenti correlati: PMID:9032240 PMID:9395435
• Nei neuroni, PAK1 è essenziale per la formazione delle spine dendritiche, lo sviluppo delle sinapsi eccitatorie e la trasmissione inibitoria GABAergica, in parte attraverso la stabilizzazione della F-actina e la fosforilazione della catena leggera regolatoria della miosina II.
• PAK1 è stato implicato nel cancro: è sovraespresso nelle cellule e nei tessuti del cancro gastrico (PubMed:25766321), promuove la migrazione e l'invasione cellulare e fosforila substrati coinvolti nel rimodellamento della cromatina (MORC2, PubMed:23260667) e nella transizione epiteliale-mesenchimale (SNAI1, PubMed:15833848). Riferimenti correlati: PMID:25766321 PMID:23260667 PMID:15833848
• Inoltre, PAK1 partecipa alla secrezione di insulina (PubMed:22669945), alla risposta al danno del DNA e alla dinamica dei granuli di stress (PubMed:20417602). Riferimenti correlati: PMID:22669945 PMID:20417602

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 1-100 di PAK1 umano, corrispondente alla regione N-terminale. Questa regione è probabilmente conservata tra umano, topo e ratto, coerente con la reattività crociata riportata.
• Per il Western blot (WB), il peso molecolare previsto di PAK1 è di circa 61 kDa; tuttavia, modificazioni post-traduzionali o varianti di splicing possono comportare bande aggiuntive. Utilizzare condizioni riducenti appropriate e convalidare con controlli positivi noti (es. lisati di cellule HeLa o MCF-7).
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), PAK1 mostra una distribuzione subcellulare dinamica, apparendo nelle adesion focali, nei ruffles di membrana e nel nucleo a seconda del tipo cellulare e della stimolazione. La fissazione con paraformaldeide e la permeabilizzazione con Triton X-100 o metanolo possono essere adatti, ma si raccomanda l'ottimizzazione per la linea cellulare e le condizioni specifiche.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato in formati diretti o indiretti. Considerare l'uso del peptide immunogeno come controllo positivo per stabilire la sensibilità e la specificità dell'analisi.
• Questo anticorpo non è stato testato in altre applicazioni; se utilizzato per IP, ChIP o blocco funzionale, si consiglia una convalida approfondita nel sistema di campione pertinente.

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