mAb Pan-Akt di coniglio per Western Blot, IP, IF, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Pan-Akt

• AKT1 è una delle tre serina/treonina chinasi strettamente correlate (AKT1/PKBα, AKT2/PKBβ, AKT3/PKBγ) che condividono un'elevata similarità strutturale e specificità del substrato sovrapponibili, regolando collettivamente processi cellulari critici.
  Riferimenti bibliografici: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Agendo a valle di PI3K, AKT media la segnalazione di insulina e fattori di crescita (IGF1, EGF, PDGF) per controllare metabolismo, crescita cellulare, proliferazione, sopravvivenza e angiogenesi.
  Riferimenti bibliografici: PMID:12176338 PMID:12964941 PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• AKT promuove la sopravvivenza cellulare fosforilando direttamente e inattivando fattori pro-apoptotici, tra cui MAP3K5/ASK1 (Ser83) e BAD, e attivando fattori di trascrizione come CREB1 e NF-κB.
  Riferimenti bibliografici: PMID:11154276 PMID:10926925 PMID:9829964
• Attraverso la fosforilazione di TSC2 e DEPDC5/CASTOR1, AKT stimola l'attività di mTORC1, promuovendo la sintesi proteica e inibendo l'autofagia.
  Riferimenti bibliografici: PMID:12150915 PMID:12172553 PMID:31548394 PMID:33594058
• AKT fosforila FOXO1, FOXO3 e FOXO4, innescando il loro legame con le proteine 14-3-3 e la ritenzione citoplasmatica, sopprimendo così la trascrizione dei geni pro-apoptotici.
  Riferimenti bibliografici: PMID:10358075
• La proteina si localizza nel citoplasma, nel nucleo, nella membrana cellulare e nello spazio intermembrana mitocondriale, facilitando la segnalazione dipendente dal contesto; è espressa ubiquitariamente e frequentemente sovraattivata in tumori come il carcinoma prostatico e mammario.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Il peso molecolare atteso per Pan-Akt è di circa 56 kDa; a seconda della linea cellulare e delle condizioni di trattamento si può osservare una singola banda o più bande corrispondenti alle diverse isoforme.
• Per il Western blotting (WB), si consiglia di iniziare con una diluizione 1:1000 e ottimizzare in base all'abbondanza della proteina bersaglio nel tuo campione.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), utilizzare 2-5 µg di anticorpo per 500 µg di lisato proteico totale; convalidare con controlli positivi e negativi appropriati.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC) e nell'istochimica immunitario (IHC-P), ottimizzare fissazione e permeabilizzazione, e testare diluizioni comprese tra 1:50 e 1:200.
• Le applicazioni ELISA possono richiedere l'accopiamento con un anticorpo di rilevazione adatto; assicurarsi che l'anticorpo riconosca la proteina nativa nelle condizioni di saggio.
• La reattività crociata è stata riportata per Akt di uomo, topo e ratto; se si utilizzano altre specie, verificare l'omologia di sequenza nella regione dell'immunogeno (residui 1-123 dell'Akt1 umano).
• L'anticorpo riconosce tutte e tre le isoforme di AKT; per studi specifici per isoforma, confermare la specificità con controlli genetici o inibitori specifici.

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