Anticorpo monoclonale PE coniglio anti-Uomo/Mouse fosfo-Zap70-Y319+Syk-Y352 per citometria di flusso intracellulare - P43403

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ZAP70

• ZAP70 è una tirosin-chinasi di 70 kDa essenziale per l'immunità adattativa, che svolge un ruolo centrale nella segnalazione del recettore delle cellule T (TCR) fosforilando le proteine adattatrici LAT e LCP2 dopo l'attivazione.
• Dopo l'aggancio del TCR, ZAP70 viene reclutata verso i motivi ITAM fosforilati di CD3E e CD247/CD3Z sulla membrana plasmatica, un processo che rimuove la sua autoinibizione e richiede la fosforilazione mediata da LCK (PubMed:7509083).
  Riferimenti correlati: PMID:7509083
• ZAP70 regola ulteriormente la dinamica dell'attivazione delle cellule T controllando il riarrangiamento del citoscheletro, l'adesione e la mobilità, garantendo la corretta consegna degli effettori alle cellule presentanti l'antigene.
• È anche coinvolta nella downregolazione del TCR mediando l'internalizzazione e la degradazione di CD247/CD3Z attraverso l'interazione con l'ubiquitina ligasi CBL e gli adattatori SLA/SLA2, modulando così la terminazione del segnale.
• ZAP70 è espressa in cellule T, cellule natural killer, timociti precoci e pro/pre cellule B, e contribuisce sia allo sviluppo che all'attivazione delle cellule T e B.
• La proteina contiene due domini SH2 che legano specificamente gli ITAM fosforilati, un dominio chinasi legante l'ATP e subisce modifiche post-traduzionali tra cui fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione, come evidenziato dalle parole chiave UniProt come "Fosfoproteina", "Coniugazione Ubl", "Legame isopeptidico" e "Acetilazione".
• Lo splicing alternativo produce più isoforme di ZAP70 e le varianti associate a malattie sono collegate all'immunodeficienza combinata grave (SCID) a causa della segnalazione alterata del TCR.
• Il sito dell'immunogeno (Y319) è un sito chiave di fosforilazione regolatoria nella regione interdominio B, altamente conservato tra uomo e mouse, e la sua fosforilazione è fondamentale per l'attivazione di ZAP70; l'anticorpo può anche reagire in modo crociato con Syk nella sua Y352 analoga a causa dell'omologia di sequenza nella ciclo di attivazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• A causa della natura fosfo-specifica di questo anticorpo, aggiungere inibitori delle fosfatasi in tutti i tamponi di lisi, fissazione e colorazione per mantenere i livelli di fosforilazione durante la lavorazione del campione.
• Validare la specificità dell'anticorpo confrontando i segnali nelle cellule stimolate rispetto a quelle non stimolate, oppure trattando i campioni con lambda fosfatasi prima della colorazione.
• L'anticorpo è validato per citometria di flusso intracellulare (FC intra); assicurarsi di utilizzare protocolli di fissazione e permeabilizzazione ottimizzati (ad esempio con permeabilizzazione a base di metanolo o saponina) per ottenere i migliori risultati.
• Per studi di segnalazione delle cellule T, considerare l'utilizzo di controlli positivi noti come cellule Jurkat stimolate con anti-CD3/CD28 o PBMC umane primarie, e controlli negativi come cellule T a riposo o cellule B carenti di Syk se si valuta la reattività crociata.

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