PE Coniglio anti-Mouse TNF-α Anticorpo Monoclonale per Citometria a Flusso (Intracellulare) - P06804

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del TNF-α

• Identità proteica: Il fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-α), noto anche come cachectina o TNFSF2, è una potente citochina pro-infiammatoria.
• Funzione principale: Si lega a TNFRSF1A/TNFR1 e TNFRSF1B/TNFBR, mediando diverse risposte cellulari tra cui apoptosi, proliferazione cellulare e differenziazione.
• Ruolo immunitario: Secreto principalmente dai macrofagi; agisce come pirogeno endogeno causando febbre direttamente direttamente o tramite induzione dell'interleuchina-1, e contribuisce alla cachessia nell'infiammazione cronica.
• Effetti metabolici: Induce resistenza all'insulina inibendo la fosforilazione della tirosina IRS1 indotta dall'insulina e l'assorbimento di glucosio negli adipociti, parzialmente attraverso la degradazione della proteina GKAP42. Riferimenti correlati: PMID:25586176
• Remodeling osseo: Promuove l'osteoclastogenesi, mediando così il riassorbimento osseo. Riferimenti correlati: PMID:32741026
• Angiogenesi: Gioca un ruolo nell'angiogenesi inducendo sinergicamente la produzione di VEGF con IL-1β e IL-6.
• Funzione delle isoforme: La forma del dominio intracellulare (ICD) del fattore di necrosi tumorale induce la produzione di IL-12 nelle cellule dendritiche.
• Localizzazione subcellulare: Esiste come precursore ancorato alla membrana (proteina transmembrana di tipo II) e in una forma secreta solubile dopo il clivaggio proteolitico.
• Modificazioni post-traduzionali: Le caratteristiche includono glicosilazione N-legata, un ponte disolfuro, lipidazione (miristoilazione) e fosforilazione; queste regolano il traffico e l'attività.

Guida Sperimentale e Suggerimenti Tecnici

• Questo anticorpo monoclonale di coniglio coniugato con PE è progettato per la citometria a flusso intracellulare (FC). È richiesta la permeabilizzazione delle cellule per rilevare il TNF-α intracellulare.
• Considerare l'utilizzo della proteina immunogena ricombinante (aa 80-235) come controllo positivo o agente di blocco per confermare la specificità.
• Dato che il TNF-α è in gran parte secreto, la stimolazione con LPS o PMA/ionomicina in presenza di un inibitore del trasporto proteico (es. brefeldina A) può potenziare la colorazione intracellulare nei macrofagi o nelle cellule T.
• Convalidare l'anticorpo nel sistema di campione pertinente (es. splenociti di topo o linee cellulari di macrofagi) e includere appropriati controlli isotipici.
• Proteggere il coniugato PE dalla luce ed evitare cicli di congelamento-scongelamento per mantenere l'intensità di fluorescenza.

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