Anticorpo monoclonale PE Rabbit anti-Rat IFN-gamma per citometria a flusso intracellulare - P01581

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione dell'IFN-gamma

• L'interferone gamma (IFN-gamma) è una citochina interferonica di tipo II prodotta principalmente dai linfociti T attivati e dalle cellule natural killer (NK), e agisce come mediatore centrale dell'immunità innata e adattativa.
• Esplica attività antimicrobiche, antivirali e antitumorali attivando le cellule immunitarie effettrici e potenziando la presentazione dell'antigene attraverso le vie MHC di classe I e II.
• Trasmette il segnale attraverso la via JAK-STAT: in seguito al legame con il suo recettore IFNGR1, induce l'attivazione di JAK2, JAK1 e STAT1, portando alla traslocazione nucleare di STAT1 e alla trascrizione di geni regolati dall'interferone, come IRF1.
• Aumenta la presentazione dell'antigene MHC di classe I inducendo la sostituzione delle subunità costitutive del proteasoma con subunità dell'immunoproteasoma e inducendo l'attivatore PA28, migliorando così la generazione dei peptidi e il repertorio disponibile per il caricamento su MHC.
• Promuove l'espressione di MHC di classe II aumentando la regolazione di molecole chiave come le catepsine B, H e L (per similitudine).
• Partecipa alla regolazione delle cellule staminali ematopoietiche, influenzandone lo sviluppo, la quiescenza e la differenziazione (per similitudine).
• La proteina è secreta e presenta caratteristiche strutturali tipiche, tra cui un peptide segnale, siti di glicosilazione e una modifica con acido pirrolidone carbossilico.
• La proteina IFN-gamma matura di ratto ha un peso molecolare previsto di circa 18 kDa (17918 Da), coerente con la progettazione dell'immunogeno.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'anticorpo è progettato per la citometria a flusso intracellulare (FC intracellulare). Assicurarsi di utilizzare protocolli appropriati di fissazione e permeabilizzazione per preservare la fluorescenza PE e l'accessibilità dell'antigene.
• Poiché l'immunogeno copre la regione del peptide maturo (aa 20-156), è probabile che l'anticorpo riconosca la forma secreta e processata dell'IFN-gamma di ratto.
• Eseguire esperimenti di titolazione per determinare la concentrazione di lavoro ottimale per il proprio tipo cellulare e per le condizioni di stimolazione specifiche.
• Validare le prestazioni dell'anticorpo con controlli positivi appropriati, come splenociti di ratto stimolati con PMA/ionomicina o linee cellulari T attivate, e includere controlli isotipici.
• Proteggere dalla luce i campioni coniugati con PE per prevenire il fotobleaching e utilizzare impostazioni di compensazione appropriate se vengono combinati con altri fluorofori.

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