Anticorpo monoclonale Rat anti-Mouse CD45R/B220 coniugato con PE per Citometria a Flusso - P06800 / P08575

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CD45R/B220

• CD45R/B220, codificato dal gene Ptprc, è una fosfatasi proteica tirosinica di tipo recettoriale (PTPase) nota anche come Antigene Comune dei Leucociti (L-CA) e Antigene Linfocitario 5 (Ly-5). È espresso prevalentemente sulle cellule ematopoietiche, inclusi i linfociti B e T, ed esiste in multiple isoforme generate da splicing alternativo.
• La proteina funge da regolatore critico della segnalazione del recettore delle cellule T modulando l'attività delle chinasi della famiglia Src come LYN e FYN. Defosforila LYN, influenzando le cascate di segnalazione a valle essenziali per l'attivazione e la co-attivazione delle cellule T dopo il legame con DPP4.
• Alle sinapsi immunologiche tra cellule presentanti l'antigene (APC) e cellule T, CD45 interagisce con CLEC10A sulle cellule dendritiche immature, che riconosce il CD45 che trasporta l'antigene Tn sulle cellule T effettrici. Questa interazione aiuta a regolare finemente le soglie di attivazione delle cellule T e a limitare le risposti autoreattive (Per similarità).
• CD45 contiene due domini fosfatasici intracellulari: il primo dominio mostra attività catalitica, mentre il secondo sembra regolare la specificità del substrato. La regione extracellulare è pesantemente glicosilata e contribuisce alle interazioni con i ligandi e alle funzioni specifiche delle isoforme.
• La proteina si localizza principalmente alla membrana plasmatica ed è arricchita nei raft di membrana e nelle sinapsi immunologiche, dove organizza spazialmente i complessi di segnalazione a seguito il coinvolgimento dell'antigene.
• Come glicoproteina transmembrana e membro della famiglia delle fosfatasi proteiche, CD45 è un marcatore ben consolidato per le linee cellulari immunitarie. L'isoforma B220 è specificamente associata alle cellule B ed è ampiamente utilizzata per identificare le popolazioni di cellule B nei modelli murini.
• Le modificazioni post-traduzionali, inclusa la fosforilazione e la glicosilazione, modulano l'attività enzimatica di CD45 e l'espressione di superficie cellulare, influenzando così la dinamica della segnalazione delle cellule immunitarie.
• Sebbene studiato principalmente nelle cellule linfoidi, CD45 svolge anche ruoli in altri sottogruppi di leucociti, contribuendo a risposte immunitarie innate e adattative integrate.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico derivato da una regione conservata del CD45R/B220 topo/umano. L'anticorpo risultante è previsto che riconosca il CD45R/B220 di topo; la reattività crociata con ortologhi umani deve essere convalidata sperimentalmente se necessario.
• Questo anticorpo è coniugato con PE (ficoeritrina), un fluoroforo luminoso adatto a pannelli multicolor per la citometria a flusso. Considerare di titolare l'anticorpo per ottimizzare il rapporto segnale-rumore e minimizzare il legame non specifico nel sistema cellulare specifico.
• Per le applicazioni di citometria a flusso, utilizzare coloranti vitali appropriati e reagenti di blocco del recettore Fc per ridurre la colorazione di fondo. Analizzare tessuti linfoidi di topo freschi o crioconservati correttamente (milza, linfonodi) per rilevare le popolazioni di cellule B positive per B220.
• Dato l'intervallo di peso molecolare riportato (130–144 kDa) che riflette lo splicing alternativo e la glicosilazione, confermare l'espressione e la dimensione della banda mediante western blotting se si adatta questo prodotto per metodi di rilevamento ortogonali, sebbene l'applicazione validata principale sia la citometria a flusso.

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