Anticorpo monoclonale coniglio anti-IFN-gamma umano PE/Cianina7 per citometria a flusso intracellulare - P01579

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'interferone gamma

• L'interferone gamma (IFN-γ) è un interferone di tipo II secreto prevalentemente da linfociti T attivati e cellule natural killer (NK), agendo come una citochina pleiotropica chiave nella regolazione immunitaria.
• Esercita risposte antimicrobiche, antivirali e antitumorali cruciali attivando le cellule immunitarie effetrici e potenziando la presentazione degli antigeni.
  Riferimenti correlati:
  PMID:16914093
  PMID:8666937
• Al legame con il suo recettore IFNGR1, l'IFN-γ innesca la cascata di segnalazione JAK-STAT, portando all'attivazione di STAT1, alla translocazione nucleare e alla trascrizione dei geni regolati dall'IFN-γ, inclusi fattori di trascrizione come IRF1.
  Riferimenti correlati:
  PMID:8349687
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• L'IFN-γ potenzia la presentazione degli antigeni MHC di classe I inducendo la sostituzione delle subunità del proteasoma costitutivo con subunità dell'immunoproteasoma e up-regolando l'attivatore PA28, aumentando così la quantità, la qualità e il repertorio dei peptidi per il caricamento MHC di classe I.
  Riferimenti correlati:
  PMID:866697
  PMID:8163024
  PMID:11112687
• Up-regola anche i complessi MHC di classe II sulla superficie cellulare promuovendo l'espressione di molecole chiave come le catepsine B, H e L, ottimizzando ulteriormente la presentazione degli antigeni.
  Riferimenti correlati:
  PMID:7729559
• Partecipa alla regolazione dello sviluppo, della quiescenza e della differenziazione delle cellule staminali ematopoietiche in condizioni omeostatiche. (Per similarità)
• L'IFN-γ è una glicoproteina secreta con una massa molecolare calcolata di circa 19,3 kDa; è caratterizzata da un peptide segnale, glicosilazione e un sito di scissione su una coppia di residui basici (Parole chiave UniProt).

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per la citometria a flusso intracellulare, stabilire condizioni appropriate di fissazione e permeabilizzazione cellulare per consentire il rilevamento dell'IFN-γ nelle cellule T o NK attivate; stimolanti comuni includono PMA/ionomicina in presenza di un inibitore del trasporto proteico.
• L'immunogeno (aa 24–166) corrisponde alla forma secreta matura dell'IFN-gamma umano; pertanto, ci si aspetta che l'anticorpo riconosca la citochina accumulata intracellularmente, rendendolo adatto per saggi funzionali delle citochine.
• Includere controlli di compensazione appropriati quando si utilizza il coniugato PE/Cianina7 in pannelli multicolore, e considerare l'uso di un canale di scarico o un colorante di vitalità per escludere le cellule morte.
• Validare la specificità della colorazione in campioni di controllo positivi e negativi pertinenti, come cellule mononucleari del sangue periferico umano stimolate rispetto a non stimolate, per confermare il rilevamento dell'IFN-γ endogeno.

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