PE/Cyanine7 Coniglio anti-Umano TNF-α Anticorpo Monoclonale per FC (intra) - P01375

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del TNF

• Il TNF-α (cachectina, TNF-alpha, TNFSF2) è una citochina pro-infiammatoria pleiotropa appartenente alla superfamiglia dei ligandi del fattore di necrosi tumorale, esistente sia come proteina transmembrana di tipo II che come omotrimero solubile dopo clivaggio proteolitico.
• Viene secreto principalmente da macrofagi attivati e si lega ai suoi recettori TNFRSF1A/TNFR1 e TNFRSF1B/TNFBR, innescando vie di segnalazione che possono portare alla morte cellulare, alla sopravvivenza, alla differenziazione o alla proliferazione a seconda del contesto cellulare.
• Il TNF-α agisce come pirogeno endogeno, inducendo la febbre direttamente o tramite stimolazione dell'IL-1, ed è un mediatore chiave della cachessia nell'infiammazione cronica e nel cancro.
• Nelle cellule T regolatorie (Tregs), il TNF-α compromette la funzione soppressiva up-regolando la fosfatasi proteica 1 (PP1), che defosforila FOXP3 a Ser-418, inattivando così FOXP3 e compromettendo l'attività dei Treg nell'artrite reumatoide. Riferimenti correlati: PMID:23396208
• Il TNF-α può mediare l'attività antitumorale: nelle cellule del carcinoma della vescica, i neutrofili stimolati dal BCG uccidono le cellule tumorali tramite un meccanismo dipendente dal TNF-α che agisce in sinergia con i mimetici SMAC. Riferimenti correlati: PMID:16829952 PMID:22517918 PMID:23396208
• Promuove l'angiogenesi inducendo sinergicamente la produzione di VEGF con IL-1β e IL-6, e stimola l'osteoclastogenesi, contribuendo così al riassorbimento osseo. Riferimenti correlati: PMID:12794819
• Il dominio intracellulare (ICD) del TNF-α può essere generato tramite proteolisi intramembranica regolata ed è stato dimostrato che induce la produzione di IL-12 nelle cellule dendritiche.
• Il TNF-α è localizzato sulla membrana cellulare ed è anche secreto; le modificazioni post-traduzionali includono glicosilazione, fosforilazione, miristoilazione e formazione di ponti disolfuro, che modulano la sua stabilità e funzione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno (aa 77-233) corrisponde al dominio extracellulare solubile del TNF-α umano; ci si aspetta che questo anticorpo riconosca sia il precursore transmembrana che la citochina matura secreta.
• Per la citometria a flusso intracellulare (FC intra), ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione cellulare. Utilizzare cellule non stimolate o stimolazioni irrilevanti come controlli negativi.
• Titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione di colorazione ottimale per il proprio sistema sperimentale specifico e tipo di cellule.
• Dato che la reattività incrociata è limitata all'uomo, validare la specificità nei campioni umani e considerare l'uso di controlli biologici abbinati alla specie.

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