Anticorpo monoclonale coniugato PE/Cyanine7 di coniglio anti-CD8a Umano/Scimmia per Citometria a Flusso - P01732

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CD8a

• CD8A codifica per la catena alfa della glicoproteina di superficie dei linfociti T CD8, un corecettore critico nell'immunità adattativa. Esiste come eterodimero alfa/beta legato da ponti disolfuro o come omodimero alfa/alfa.
• La catena alfa di CD8 funziona come corecettore per le molecole MHC di classe I, interagendo simultaneamente con il recettore delle cellule T (TCR) e l'MHC I sulle cellule che presentano l'antigene. Ciò recluta la chinasi Src LCK, innescando le vie di segnalazione a valle che portano all'attivazione dei linfociti T citotossici, alla produzione di citochine e all'uccisione delle cellule bersaglio.
• Nelle cellule natural killer (NK), gli omodimeri di CD8A forniscono un meccanismo di sopravvivenza e facilitano la coniugazione e la lisi di più cellule bersaglio. Promuovono anche la sopravvivenza e la differenziazione dei linfociti attivati in cellule T CD8 di memoria.
• La localizzazione subcellulare è principalmente alla membrana cellulare come proteina di membrana di tipo I a passaggio singolo. Viene prodotta anche una forma solubile secreta mediante splicing alternativo.
• Specificità tissutale: Nelle cellule T derivate dal timo, il CD8 è tipicamente costituito da un eterodimero alfa/beta. Gli omodimeri di CD8A si trovano su sottopopolazioni di cellule NK, cellule T di memoria, linfociti intraepiteliali, monociti e cellule dendritiche. L'espressione è regolata positivamente sulle cellule dendritiche plasmacitoidi in seguito a stimolazione virale.
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione, che spiega il peso molecolare osservato superiore a quello previsto (non modificato ~26 kDa; forme mature a 21, 25 e 30 kDa), e la palmitoilazione, che ancora la proteina ai lipid rafts.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo è una proteina ricombinante corrispondente agli amminoacidi 22-182, che comprende il dominio extracellulare di CD8A. Questa regione è cruciale per l'interazione con l'MHC I ed è esposta sulla superficie cellulare, rendendola un bersaglio ideale per applicazioni di citometria a flusso.
• Per la citometria a flusso (FC), titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale per il proprio campione specifico. Includere appropriati anticorpi di controllo isotipo coniugati con lo stesso fluoroforo (PE/Cyanine7) per valutare il legame aspecifico.
• Poiché PE/Cyanine7 è un colorante tandem, evitare l'esposizione prolungata alla luce e ai fissativi che potrebbero degradare il colorante. Considerare l'uso di un controllo di compensazione quando si eseguono pannelli multicolore per correggere la sovrapposizione spettrale.
• Validare le prestazioni dell'anticorpo utilizzando popolazioni cellulari positive e negative note: ad esempio, linfociti T del sangue periferico umano (CD8+ positivo) rispetto ai linfociti B (negativo) o linee cellulari appropriate.
• Se si rileva CD8A intracellulare (ad es. in linfociti T attivati o residenti nei tessuti), ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione che preservano l'epitopo e il fluoroforo.

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