Anticorpo monoclonale di coniglio anti-PER2 (umano) per WB, ELISA, ChIP - O15055

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: funzione e localizzazione di PER2

• PER2 (Period circadian protein homolog 2), noto anche come proteina dell'orologio circadiano PERIOD 2, è un componente centrale dell'orologio circadiano molecolare. Funge da repressore trascrizionale all'interno del ciclo di feedback trascrizione/traduzione (TTFL) che guida ritmi di circa 24 ore nell'espressione genica.
• Insieme a PER1, CRY1 e CRY2, PER2 forma il braccio negativo del TTFL. Interagisce direttamente con gli eterodimeri CLOCK-BMAL1 sui promotori E-box per inibire la propria espressione, mentre le modifiche post-traduzionali (es. fosforilazione, acetilazione, ubiquitinazione) regolano finemente il periodo (tau) dei ritmi circadiani.
• PER2 contribuisce alla repressione controllata dall'orologio attraverso molteplici modalità: recluta complessi di rimodellamento della cromatina SIN3-HDAC e istone metiltransferasi H3K9 (SUV39H1/2) sui promotori dei geni dell'orologio, e interagisce anche con proteine leganti l'RNA ed elicasi nei siti di terminazione 3′ per modulare la terminazione della trascrizione.
• La proteina è coinvolta nella regolazione metabolica e cardiovascolare. Agisce come coattivatore di PPARA e corepressore di NR1D1, legandosi ritmicamente ai promotori di geni come BMAL1 e G6PC1, e reprime l'adipogenesi mediata da PPARG. PER2 regola anche la produzione di ossido nitrico e prostaglandine nelle aorte e controlla l'uptake del glutammato tramite l'espressione di VGLUT1.
• Le mutazioni bi-alleliche con perdita di funzione in PER2 causano la sindrome da fase del sonno avanzata familiare (FASPS), sottolineando il suo ruolo essenziale nell'adattamento dell'orologio circadiano ai cicli luce-buio ambientali.
• PER2 si localizza principalmente nel nucleo, ma si trova anche nel citoplasma, nella regione perinucleare e nel nucleolo, riflettendo uno shuttling dinamico e funzioni specifiche per compartimento.
• La proteina è ampiamente espressa, con livelli elevati nel muscolo scheletrico e nel pancreas, e livelli inferiori nel polmone. L'isoforma 2 è rilevata specificamente nei cheratinociti.
• Le caratteristiche strutturali chiave includono due domini PAS e un dominio di localizzazione citoplasmatica C-terminale che contribuiscono alle interazioni proteina-proteina e al traffico subcellulare.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 1–100 di PER2 umano (O15055), una regione N-terminale ben conservata e suscettibile di generare anticorpi che riconoscono sia le isoforme a lunghezza intera che quelle troncate.
• Per il western blotting (WB), attendersi una banda a circa 137 kDa; utilizzare lisati nucleari o di cellule intere da tessuti umani o linee cellulari note per esprimere PER2 (es. muscolo scheletrico, pancreas). I livelli endogeni di PER2 oscillano durante il ciclo circadiano: considerare la raccolta dei campioni in tempi definiti (zeitgeber times).
• Per le applicazioni ELISA, l'accoppiamento dell'anticorpo con un reagente di rilevamento che mira a un epitopo non sovrapponibile può migliorare la sensibilità e la specificità; validare l'intervallo dinamico utilizzando la proteina PER2 ricombinante o lisati cellulari controllati.
• Nella immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), l'anticorpo può arricchire le regioni del promotore contenenti E-box dei geni controllati dall'orologio (es. PER1, CRY1). Includere regioni di controllo negativo appropriate e confermare l'arricchimento tramite qPCR in condizioni di orologio sincronizzato.
• Dato il ruolo delle modifiche post-traduzionali nella funzione di PER2, considerare l'uso di inibitori della fosfatasi o condizioni denaturanti se si studiano interazioni o localizzazioni dipendenti dalla fosforilazione.

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