Anticorpo policlonale PERK per coniglio per IF/ICC, ELISA - Q9NZJ5

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della PERK

• Identità proteica e isoforme: PERK (EIF2AK3) è anche nota come chinasi del reticolo endoplasmatico simile a PRKR, chinasi pancreatica dell'eIF2-alfa e tirosina chinasi EIF2AK3. Appartiene alla famiglia delle chinasi di eIF2α ed è il sensore primario dello stress del RE.
• Chinasi della risposta alle proteine non ripiegate (UPR): PERK è una chinasi sensore dello stress metabolico che fosforila la subunità α del fattore di iniziazione della traduzione eucariotica 2 (EIF2S1/eIF-2α) in risposta a proteine non ripiegate e a vari stress cellulari.
  Riferimenti correlati:
  PMID:10026192, PMID:10677345, PMID:11907036
• Attivazione da proteine mal ripiegate: Riconosce e lega specificamente le proteine mal ripiegate nel RE, il che innesca l'autofosforilazione e l'attivazione, avviando la risposta integrata allo stress (ISR).
  Riferimenti correlati:
  PMID:10677345, PMID:27917829, PMID:31023583
• Riprogrammazione della traduzione: La fosforilazione di eIF2α attenua la sintesi proteica globale dipendente dalla capsina, mentre promuove selettivamente la traduzione di mRNA responsivi allo stress, inclusi i fattori di trascrizione ATF4 e QRICH1, riprogrammandone così l'espressione genica.
  Riferimenti correlati:
  PMID:10026192, PMID:10677345, PMID:31023583
• Regolazione mitocondriale: La segnalazione UPR mediata da PERK aumenta la fosforilazione ossidativa mitocondriale sovraregolando l'espressione di COX7A2L tramite ATF4. Nei siti di contatto tra mitocondri e RE, ATAD3A inibisce PERK per proteggere i mitocondri da una UPR eccessiva.
  Riferimenti correlati:
  PMID:31023583, PMID:39116259
• Attivazione di NRF2: Oltre a eIF2α, PERK fosforila NFE2L2/NRF2, provocandone la dissociazione da KEAP1 e la successiva traslocazione nucleare, che attiva i geni antiossidanti e di detossificazione (per similarità).
• Localizzazione subcellulare: Membrana del reticolo endoplasmatico – PERK è una proteina transmembrana che risiede prevalentemente nel RE.
• Distribuzione tissutale: Espressa ubiquitariamente, con livelli particolarmente elevati nei tessuti secretori, in linea con il suo ruolo di monitoraggio dell'ambiente di ripiegamento del RE.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde a una regione compresa tra gli amminoacidi 50–600 della PERK umana. Per IF/ICC sono raccomandate condizioni standard di permeabilizzazione e fissazione adatte a proteine residenti nel RE. Eseguire la titolazione dell'anticorpo primario per ottimizzare il rapporto segnale/rumore.
• Per l'utilizzo in ELISA, si consiglia di includere un peptide di bloccaggio o una proteina PERK ricombinante come controllo di specificità. Validare la reattività crociata con campioni di topo utilizzando lisati di tessuti con elevata attività secretoria.
• Poiché PERK è una chinasi transmembrana del RE, se l'anticorpo viene utilizzato in altri test immunologici oltre a quelli convalidati, si consiglia di utilizzare detergenti delicati durante l'estrazione delle proteine per preservare gli epitopi conformazionali.

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