Anticorpo monoclonale di coniglio Phospho-AKT1-S124 per WB ed ELISA - P31749

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di AKT1

• AKT1 è una serina/treonina-proteina chinasi appartenente alla famiglia AKT (AKT1, AKT2, AKT3) che regola processi chiave tra cui metabolismo, proliferazione, sopravvivenza cellulare, crescita e angiogenesi (PubMed:11882383, PubMed:15526160, PubMed:15861136). Riferimenti correlati: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Segnala a valle di PI3K per mediare gli effetti di insulina e fattori di crescita, promuovendo l'assorbimento del glucosio (SLC2A4/GLUT4), la sintesi del glicogeno (tramite inibizione di GSK3) e la sintesi proteica (tramite attivazione di mTORC1) (PubMed:11994271, PubMed:12150915, PubMed:12172553). Riferimenti correlati: PMID:11994271 PMID:12150915 PMID:12172553
• AKT1 regola la sopravvivenza cellulare fosforilando e inibendo fattori pro-apoptotici: diminuisce l'attività di MAP3K5/ASK1 (PubMed:11154276), stimola BAD (PubMed:10926925) e attiva la trascrizione NF-kappa-B di BCL2/MCL1 (PubMed:9829964). Riferimenti correlati: PMID:11154276 PMID:10926925 PMID:9829964
• La fosforilazione dei fattori di trascrizione FOXO (FOXO1, FOXO3, FOXO4) da parte di AKT1 porta al legame con 14-3-3 e alla ritenzione citoplasmatica, inibendo così la trascrizione di geni pro-apoptotici e di arresto del ciclo cellulare (PubMed:10358075). Riferimenti correlati: PMID:10358075
• Localizzato nel citoplasma, nucleo, membrana cellulare e spazio intermembrana mitocondriale, AKT1 si trasloca dinamicamente in risposta a stimoli; nei mitocondri, modula l'assorbimento del calcio e l'attività del canale TMEM175, indipendentemente dalla sua funzione chinasica (PubMed:32228865, PubMed:30504268).
• Esresso ubiquitariamente nei tessuti umani, AKT1 è frequentemente iperattivato nei tumori; livelli elevati di phospho-Tyr176 AKT1 correlano con la progressione del cancro al seno dagli stadi normali a quelli metastatici.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per garantire la fosfo-specificità, confrontare i segnali da lisati trattati con e senza fosfatasi lambda, o eseguire saggi di competizione con il peptide immunogeno e la sua controparte non fosforilata.
• Per il Western blot, i lisati devono essere preparati con inibitori delle fosfatasi; il peso molecolare atteso è di circa 56 kDa; si raccomanda un controllo di caricamento come AKT1 totale o GAPDH.
• Nelle applicazioni ELISA, utilizzare il peptide fosfo-sintetico come standard per generare una curva di calibrazione per l'analisi semi-quantitativa di AKT1-S124 fosforilato in campioni biologici.
• L'attivazione della fosforilazione di AKT1 può essere verificata in linee cellulari stimolate con insulina o fattori di crescita; considerare l'uso di inibitori di PI3K (es. LY294002) per confermare la dipendenza dal percorso.

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