pAb di coniglio Phospho-AKT1-T308+AKT2-T309+AKT3-T305 - P31749 / P31751 / Q9Y243

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di AKT1 (serina/treonina-protein chinasi RAC-alfa)

• AKT1 (PKBα, RAC-PK-alfa) è una serina/treonina chinasi espressa ubiquitousamente che, insieme a AKT2 e AKT3, forma la famiglia delle chinasi AKT centrale nella segnalazione PI3K, che regola metabolismo, proliferazione, sopravvivenza, crescita e angiogenesi. Riferimenti correlati: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Attraverso la fosforilazione di numerosi substrati, AKT1 media l'assorbimento del glucosio indotto dall'insulina (TBC1D4) e la sintesi del glicogeno (GSK3A/GSK3B). Riferimenti correlati: PMID:11994271
• Promuove la sopravvivenza cellulare fosforilando MAP3K5/ASK1 alla Ser-83, inibendo l'apoptosi, e attiva la segnalazione di mTORC1 tramite la fosforilazione di TSC2 e DEPDC5. Riferimenti correlati: PMID:11154276 PMID:12150915 PMID:12172553 PMID:31548394 PMID:33594058
• AKT1 regola i fattori di trascrizione FOXO1/3/4 e CREB1, influenzando l'espressione genica pro-sopravvivenza e la trascrizione dipendente da NF-κB. Riferimenti correlati: PMID:10358075 PMID:9829964
• Subcellularmente, AKT1 si sposta tra citoplasma, nucleo, membrana cellulare e mitocondri, dove modula l'assorbimento del calcio mitocondriale e altre funzioni specifiche degli organelli.
• Le fosforilazioni attivanti chiave si verificano alla Thr-308 (o la corrispondente Thr-309 in AKT2, Thr-305 in AKT3) nell'anello di attivazione e alla Ser-473 nel motivo idrofobico, attivate dalla stimolazione dei fattori di crescita.
• AKT1 è frequentemente disregolata nei tumori (prostata, mammella) e agisce come proto-oncogene, con livelli di fosforilazione elevati che correlano con la progressione della malattia.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Utilizzare inibitori di fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare il segnale di fosforilazione; convalidare la fosfospecificità confrontando con anticorpi AKT totali o tramite trattamento con fosfatasi.
• L'immunogeno è un fosfopetide sintetico intorno alla Thr-308 dell'AKT1 umano; si prevede che l'anticorpo rilevi AKT1, AKT2 e AKT3 fosforilati nei siti corrispondenti quando testato in specie appropriate.
• Per Western blot, sono attese più bande corrispondenti alle diverse isoforme di AKT (~48-55 kDa); confermare l'identità della banda con controlli specifici per isoforma o siRNA se necessario.
• Per ELISA, considerare una configurazione accoppiata di anticorpi AKT fosfospecifico/totale per normalizzare il caricamento delle proteine.
• Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo primario per il tuo tipo di campione specifico; le diluizioni iniziali suggerite per WB sono tipicamente 1:500-1:2000, ma devono essere determinate empiricamente.

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