Fosfo-AKT1-T450 + AKT2-T451 + AKT3-T447 mAb di coniglio per WB, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della famiglia AKT

• La famiglia AKT comprende tre chinasi proteiche serina/treonina strettamente correlate: AKT1 (PKB alfa, P31749), AKT2 (PKB beta, P31751) e AKT3 (PKB gamma, Q9Y243), codificate rispettivamente dai geni AKT1, AKT2 e AKT3. Condividono un'alta omologia di sequenza e ruoli biologici sovrapposti ma distinti.
• Le chinasi AKT regolano diversi processi cellulari tra cui il metabolismo, la proliferazione, la sopravvivenza cellulare, la crescita e l'angiogenesi fosforilando un'ampia gamma di substrati a valle (più di 100 riportati).
  Riferimenti correlati: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136
• Dopo l'attivazione da parte dei fattori di crescita e della segnalazione PI3K, AKT media l'assorbimento di glucosio indotto dall'insulina tramite il trasloco di SLC2A4/GLUT4, promuove la sintesi del glicogeno inibendo GSK3 e stimola la sintesi proteica attraverso l'attivazione della via mTORC1.
  Riferimenti correlati: PMID:11994271, PMID:12150915, PMID:12172553
• AKT promuove la sopravvivenza cellulare fosforilando e inattivando fattori pro-apoptotici come MAP3K5/ASK1 e BAD, e attivando fattori di trascrizione come CREB1 che guidano l'espressione genica anti-apoptotica.
  Riferimenti correlati: PMID:11154276, PMID:9829964, PMID:10926925
• La localizzazione subcellulare include il citoplasma, il nucleo, la membrana cellulare e lo spazio intermembrana mitocondriale, riflettendo i suoi ampi ruoli di segnalazione nelle risposte cellulari compartimentate.
• Le modifiche post-traduzionali, in particolare la fosforilazione, sono critiche per l'attività di AKT; due residui chiave (Thr-308 e Ser-473 in AKT1) sono essenziali per la piena attivazione, mentre la fosforilazione nel motivo di svolta (Thr-450 in AKT1, equivalente a Thr-451 in AKT2 e Thr-447 in AKT3) può influenzare la stabilità della chinasi e le interazioni proteiche.
• AKT1 è espressa ubiquitariamente, con un'espressione alterata e una fosforilazione legate a stati patologici incluso il cancro; livelli elevati di fosfo-AKT sono spesso osservati nei tumori al seno e alla prostata.
• Le parole chiave associate ad AKT1 (UniProt P31749) includono apoptosi, metabolismo dei carboidrati, membrana cellulare, citoplasma, chinasi, nucleo, fosfoproteina, proto-oncogene, chinasi proteica serina/treonina e regolazione della traduzione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico fosforilato che copre la regione Thr-450 di AKT1 umana; ci si aspetta che l'anticorpo riconosca AKT1, AKT2 e AKT3 quando fosforilate nei rispettivi siti equivalenti (T450/T451/T447).
• Per il Western blotting, preparare i lisati con inibitori delle fosfatasi per preservare la fosforilazione; bande previste intorno a 48–55 kDa a seconda dell'isoforma. Includere appropriati controlli positivi (es. cellule stimolate con fattori di crescita) e controlli negativi (campioni non trattati o trattati con fosfatasi).
• Considerare l'uso di campioni trattati con fosfatasi o un controllo di blocco con peptide non fosforilato per confermare la fosfo-specificità del segnale.
• Per l'ELISA, abbinare con reagenti di cattura/rilevamento appropriati e validare il saggio utilizzando concentrazioni note di peptide fosforilato o lisati cellulari.

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