Anticorpo monoclonale di coniglio Phospho-AMPKα1-S496 per WB, ELISA - Q13131

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di AMPKα1

• AMPKα1, codificata dal gene PRKAA1, è la subunità catalitica alfa-1 della proteina chinasi AMP-attivata (AMPK) eterotrimerica, un sensore energetico cellulare centrale.
• In risposta a bassi livelli di ATP intracellulare, AMPKα1 fosforila enzimi metabolici chiave e fattori di trascrizione per inibire i processi anabolici (sintesi di lipidi, proteine e carboidrati) e promuovere le vie cataboliche, ripristinando così l'omeostasi energetica. Riferimenti correlati: PMID:17307971, PMID:17712357, PMID:24563466
• AMPKα1 regola direttamente il metabolismo lipidico fosforilando e inattivando le acetil-CoA carbossilasi (ACACA e ACACB), l'HMG-CoA reduttasi (HMGCR) e la lipasi sensibile agli ormoni (LIPE), controllando quindi la sintesi di acidi grassi e colesterolo.
• Svolge anche un ruolo fondamentale nell'omeostasi del glucosio fosforilando CRTC2/TORC2 (portando al suo sequestro citoplasmatico) e promuovendo la traslocazione di GLUT4 sulla membrana plasmatica.
• Oltre al metabolismo, AMPKα1 sopprime la crescita e la proliferazione cellulare inibendo la via mTORC1 tramite fosforilazione di TSC2, RPTOR e WDR24, e attiva l'autofagia tramite fosforilazione di ULK1 e WDR45/WIPI4. Riferimenti correlati: PMID:14651849, PMID:18439900, PMID:20160076, PMID:21205641, PMID:28561066, PMID:36732624, PMID:37079666
• La localizzazione subcellulare comprende citoplasma, nucleo ed endosomi tardivi, coerente con i suoi ruoli nella regolazione metabolica, nella trascrizione genica e nella segnalazione endosomiale.
• AMPKα1 è una fosfoproteina regolata dalla fosforilazione su diversi residui; la fosforilazione alla Serina496 è stata identificata e può influenzare la sua attività chinasica o la sua localizzazione.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Includere sempre inibitori di fosfatasi durante la lis cellulare e la preparazione dei campioni per preservare l'epitopo fosforilato.
• Convalidare la specificità trattando i campioni con lambda proteina fosfatasi o tramite competizione con il peptide fosforilato immunogeno; la perdita del segnale conferma la fosfo-specificità.
• Per Western blot, aspettarsi una banda a circa 64 kDa in linee cellulari umane o di topo; l'attivazione di AMPK tramite AICAR, metformina o deprivazione di glucosio può migliorare la rivelazione.
• In ELISA, si consiglia di utilizzare questo anticorpo in combinazione con un anticorpo di cattura pan-AMPKα per quantificare i livelli di fosfo-AMPKα1 (S496).

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