Anticorpo policlonale (pAb) di coniglio anti-Phospho-APP-T668 per WB ed ELISA - P05067

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della proteina precursore dell'amiloide-beta

• La proteina precursore dell'amiloide-beta (APP) è una glicoproteina transmembrana di tipo I che esiste in diverse isoforme, con APP695 predominante nei neuroni e APP751/APP770 nelle cellule non neuronali. È nota anche come ABPP, APPI e peptide amiloide vascolare cerebrale.
• L'APP funge da recettore di superficie cellulare coinvolto nella crescita dei neuriti, nell'adesione neuronale e nell'assonogenesi. L'interazione tra le molecole di APP sulle cellule adiacenti promuove la sinaptogenesi. Riferimenti correlati: PMID:25122912
• L'APP agisce come recettore di membrana della chinesina I, mediando il trasporto assonale anterogrado della beta-secretasi e della presenilina 1, e svolge un ruolo nel trasporto del carico verso le sinapsi. Riferimenti correlati: PMID:17062754 PMID:23011729
• L'APP subisce un processamento proteolitico per generare peptidi amiloide-beta, che sono chelanti metallici lipofili che legano rame, zinco e ferro. Questi peptidi promuovono l'aggregazione e la fosforilazione della tau e possono indurre stress ossidativo e neurotossicità.
• A livello subcellulare, l'APP è localizzata nella membrana cellulare, nel pericarion, nei coni di crescita, nelle vescicole rivestite di clatrina, negli endosomi precoci ed è anche secreta. Può essere trovata sulla superficie cellulare, nel nucleo e nel citoplasma in determinate condizioni.
• Specificità tissutale: L'APP è altamente espressa nel cervello e nel liquido cerebrospinale, con i livelli più alti nella corteccia frontale. È espressa anche nel rene, nel cuore e nella milza. L'isoforma APP695 è neuronale, mentre l'APP751 è abbondante nei linfociti T.
• La fosforilazione a livello della Thr668 (T668) è una modifica regolatoria chiave dell'APP. Questo anticorpo riconosce specificamente la forma fosforilata, consentendo lo studio della segnalazione e del processamento dipendenti dalla fosforilazione.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Questo anticorpo è stato prodotto contro un fosfopeptide sintetico corrispondente ai residui che circondano la Thr668 dell'APP umana. È adatto per rilevare i livelli endogeni di APP solo quando fosforilata in T668.
• Per il Western blot, un intervallo di diluizione iniziale di 1:500–1:2000 è tipico per gli anticorpi policlonali; ottimizzare in base al proprio campione e sistema di rilevamento. Convalidare la specificità trattando i lisati cellulari con lambda fosfatasi.
• Il peso molecolare previsto dell'APP a lunghezza intera è di circa 87 kDa, ma le modifiche post-traduzionali e il processamento proteolitico possono produrre bande multiple. Includere marcatori di peso molecolare appropriati.
• Per l'ELISA, utilizzare come anticorpo di cattura o di rilevamento in base al formato del saggio; l'abbinamento con un altro anticorpo anti-APP potrebbe essere necessario per un ELISA a sandwich.
• È stata riportata reattività crociata con topo e ratto; verificare nel tessuto target per confermare la reattività crociata e la specificità.
• Considerare l'uso di campioni freschi o conservati correttamente ed evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento per preservare lo stato di fosforilazione.

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