Anticorpo Monoclonale di Coniglio Fosfo-ATR-S428 per WB ed ELISA - Q13535

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Serina/treonina-proteina chinasi ATR

• ATR è una serina/treonina proteina chinasi della famiglia PIKK che agisce come sensore del danno al DNA, riconoscendo sequenze consenso [ST]-Q e fosforilando bersagli a valle in risposta a stress genotossico (PubMed:10597277, PubMed:10608806, PubMed:10859164). Riferimenti correlati: PMID:10597277, PMID:10608806, PMID:10859164
• Substrati chiave includono CHEK1, BRCA1, p53/TP53, RPA2 e RAD17, la cui fosforilazione inibisce la replicazione del DNA e la mitosi, e promuove la riparazione, la ricombinazione e l'apoptosi (PubMed:11114888, PubMed:11418864, PubMed:11865061). Riferimenti correlati: PMID:11114888, PMID:11418864, PMID:11865061
• Fosforila direttamente l'istone H2AX in Ser-139 nei siti di danno ed è necessario per l'ubiquitinazione di FANCD2 (PubMed:11673449, PubMed:15314022). Riferimenti correlati: PMID:11673449, PMID:15314022
• Critico per il mantenimento della stabilità dei siti fragili e per la corretta duplicazione del centrosoma (PubMed:12526805). Riferimenti correlati: PMID:12526805
• Regola la transizione S-G2 limitando l'attività di CDK1 durante la fase S (PubMed:30139873). Riferimenti correlati: PMID:30139873
• Agisce a livello dell'involucro nucleare: percepisce lo stress meccanico, si rilocalizza lì per fosforilare CHEK1 e promuove la rottura dell'involucro nucleare tramite fosforilazione di LMNA; media anche la rottura dei micronuclei e l'attivazione immunitaria innata cGAS-STING (PubMed:25083873, PubMed:37832547, PubMed:37788673). Riferimenti correlati: PMID:25083873, PMID:37832547, PMID:37788673
• Regola positivamente il riavvio delle forcelle di replicazione bloccate in seguito all'attivazione da parte del complesso impalcatura KHDC3L-OOEP.
• Prevalentemente nucleare, si associa ai cromosomi e all'involucro nucleare; espresso ubiquitariamente con presenza maggiore nel testicolo; un isoforma alternativa (isoforma 2) si trova solo in pancreas, placenta e fegato.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'anticorpo è stato generato contro un peptide fosforilato sintetico corrispondente alle sequenze intorno a Ser-428 di ATR umano; la specificità dovrebbe essere confermata utilizzando competizione con peptide fosforilato vs non fosforilato o lisati trattati con fosfatasi.
• Per il Western blotting, notare la grande dimensione di ATR (~301 kDa); utilizzare gel a gradiente, tempi di transfer prolungati e marcatori ad alto peso molecolare per una rilevazione ottimale.
• Le applicazioni validate sono WB ed ELISA; gli utenti finali dovrebbero titolare l'anticorpo per determinare le concentrazioni operative ottimali per le loro specifiche condizioni sperimentali.
• Poiché ATR è una chinasi a bassa abbondanza, l'arricchimento o l'immunoprecipitazione prima del WB possono migliorare il segnale in alcuni tipi di campione.
• Conservare l'anticorpo secondo le condizioni di spedizione (borsa del ghiaccio) ed evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento.

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