pAb coniglio Phospho-ATR-S428 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q13535

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ATR

• Agisce come sensore del danno al DNA, attivando la segnalazione del checkpoint in risposta a radiazioni ionizzanti, luce UV o stress della replicazione. Riferimenti correlati: PMID:10597277 PMID:10608806 PMID:10859164
• Fosforila i bersagli a valle nel motivo consenso [ST]-Q, tra cui BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 e p53/TP53, portando all'inibizione della replicazione del DNA e della mitosi e alla promozione della riparazione del DNA, della ricombinazione e dell'apoptosi. Riferimenti correlati: PMID:11114888 PMID:11418864 PMID:11865061
• Fosforila l'istone H2AX alla Serina-139 nei foci di danno al DNA, un evento critico nella risposta al danno del DNA. Riferimenti correlati: PMID:11673449
• Necessario per l'ubiquitinazione di FANCD2 ed è fondamentale per il mantenimento della stabilità dei siti fragili e la regolazione della duplicazione dei centrosomi. Riferimenti correlati: PMID:15314022 PMID:12526805
• Regola la transizione del ciclo cellulare S-G2 limitando l'attività della CDK1 durante la fase S per prevenire l'ingresso prematuro in G2. Riferimenti correlati: PMID:30139873
• Si rilocalizza sull'involucro nucleare in seguito a stress meccanico e media un checkpoint tramite la fosforilazione di CHEK1; promuove inoltre la rottura dell'involucro nucleare e dell'involucro micronucleare attraverso la fosforilazione di LMNA, attivando la via immunitaria innata cGAS-STING. Riferimenti correlati: PMID:25083873 PMID:37788673 PMID:37832547
• Si localizza prevalentemente nel nucleo e nei cromosomi, è ampiamente espresso e raggiunge i livelli più alti nel testicolo.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Poiché l'immunogeno è un fosfopeptide corrispondente alla regione Ser428, l'anticorpo dovrebbe riconoscere specificamente ATR fosforilato in questo sito. Convalidare la fosfo-specificità trattando i campioni con fosfatasi o competendo con il peptide non fosforilato.
• Per il western blotting, tenere conto dell'elevato peso molecolare di ATR (~301 kDa). Utilizzare un gel a bassa percentuale (ad esempio, gradiente 6% o 4-12%) e un trasferimento in umido prolungato (ad esempio, overnight a 4°C) per garantire un trasferimento efficiente.
• ATR è una proteina a bassa abbondanza; valutare l'arricchimento tramite immunoprecipitazione o l'uso di un substrato di rilevamento ad alta sensibilità.
• Per l'immunoistochimica e l'immunofluorescenza, includere appropriati passaggi di recupero dell'antigene e convalidare la colorazione con un controllo negativo (ad esempio, blocco peptidico o sezioni trattate con fosfatasi).
• Includere sempre inibitori di fosfatasi nei buffer di lisi per preservare lo stato di fosforilazione durante la preparazione dei campioni.
• Trattandosi di un anticorpo policlonale di coniglio, possono verificarsi variabilità tra lotti; si consiglia di ri-convalidarlo nel vostro specifico contesto sperimentale.

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