Anticorpo Policlonale di Coniglio Fosfo-ATR-T1989 per WB, IHC-P, ELISA - Q13535

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Serina/treonina-proteina chinasi ATR

• ATR è una serina/treonina-proteina chinasi nota anche come proteina correlata all'ataxia telangiectasia e Rad3 o proteina 1 correlata a FRAP. È codificata dal gene ATR (FRP1) ed esiste in almeno due isoforme, con l'isoforma 2 presente in pancreas, placenta e fegato ma non in cuore, testicolo e ovaio.
• Funziona come un sensore chiave del danno al DNA, attivando la segnalazione del checkpoint in risposta a stress genotossici come radiazioni ionizzanti, luce UV o arresto della replicazione del DNA (PubMed:10597277, PubMed:10608806, PubMed:10859164). Riferimenti correlati: PMID:10597277 PMID:10608806 PMID:10859164
• Riconosce la sequenza consenso del substrato [ST]-Q e fosforila bersagli a valle tra cui BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 e p53/TP53, inibendo così la replicazione del DNA e la mitosi mentre promuove riparazione, ricombinazione e apoptosi (PubMed:11114888, PubMed:11418864, PubMed:11865061). Riferimenti correlati: PMID:11114888 PMID:11418864 PMID:11865061
• Fosforila la 'Ser-139' dell'istone H2AX nei siti di danno al DNA, regolando la risposta al danno al DNA (PubMed:11673449); è anche necessaria per l'ubiquitinazione di FANCD2. Riferimenti correlati: PMID:11673449
• Regola le transizioni del ciclo cellulare limitando l'attività di CDK1 durante la fase S per prevenire un ingresso prematuro in G2 ed è critica per la stabilità dei siti fragili e una corretta duplicazione del centrosoma (PubMed:12526805, PubMed:30139873). Riferimenti correlati: PMID:12526805 PMID:30139873
• Agisce come sensore di stress meccanico all'involucro nucleare, dove si rilocalizza in risposta allo stress e fosforila CHEK1 per mediare un checkpoint (PubMed:25083873). Promuove anche la rottura dell'involucro nucleare dopo danno al DNA fosforilando LMNA in 'Ser-282' (PubMed:37832547). Riferimenti correlati: PMID:25083873 PMID:37832547
• Coinvolta nell'immunità innata: ATR si localizza nei micronuclei derivanti da instabilità genomica e fosforila LMNA in 'Ser-395', portando alla rottura dell'involucro micronucleare e all'attivazione del pathway cGAS-STING (PubMed:37788673). Riferimenti correlati: PMID:37788673
• La localizzazione subcellulare è prevalentemente nucleare e associata ai cromosomi; si trova anche all'involucro nucleare. Espressa in modo ubiquitario con i livelli più alti nei testicoli. Classificata sotto parole chiave tra cui fosfoproteina, danno al DNA, riparazione del DNA, chinasi e splicing alternativo.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico fosforilato intorno a T1989, quindi questo anticorpo dovrebbe riconoscere specificamente l'ATR fosforilata in questo sito. Per la validazione, considerare l'uso di un peptide non fosforilato o lisati trattati con fosfatasi come controlli negativi.
• Nel Western blot (WB), ci si aspetta una banda intorno a 301 kDa. A causa dell'elevato peso molecolare, ottimizzare le condizioni di trasferimento (es. metanolo basso, tempi di trasferimento lunghi) e utilizzare un controllo di caricamento validato di dimensioni simili.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P) e l'ELISA, assicurare appropriati passaggi di recupero dell'antigene e di blocco; la reattività incrociata con topo e ratto ne permette l'uso in modelli roditori, ma confermare con controlli tissutali rilevanti.
• Poiché la fosforilazione di ATR è indotta dal danno al DNA, trattare le cellule con agenti genotossici (es. UV, idrossiurea) può migliorare il rilevamento del segnale.

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