Phospho-Bad-S112 Rabbit mAb per WB, IHC-P, ELISA - Q92934

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di Bad (Agonista della morte cellulare associato a Bcl2)

• Bad (Bcl2-associated agonist of cell death, noto anche come componente 6 di legame Bcl-2, proteina 8 simile a Bcl-2) è un membro pro-apoptotico della famiglia Bcl-2 che promuove la morte cellulare competendo per il legame con le proteine anti-apoptotiche Bcl-X(L), Bcl-2 e Bcl-W.
• Questa competizione interrompe l'eterodimerizzazione di Bcl-X(L) con BAX, invertendo così l'attività di soppressione della morte di Bcl-X(L), sebbene non quella di Bcl-2, e collega la segnalazione del recettore dei fattori di crescita all'apoptosi (Per somiglianza).
• Il gene BAD (Gene ID: 572) codifica un unico prodotto proteico con un peso molecolare di circa 18 kDa, come confermato da UniProt (Q92934, 18392 Da).
• Bad è localizzata alla membrana mitocondriale esterna e al citoplasma, dove integra segnali di sopravvivenza e di morte; la sua attività è strettamente regolata da modifiche post-traduzionali.
• Sono state identificate molteplici modifiche post-traduzionali chiave su Bad, inclusa la fosforilazione, l'acetilazione e la metilazione, che modulano la sua funzione pro-apoptotica e la localizzazione subcellulare.
• La fosforilazione a Ser-112 (e siti circostanti) inattiva Bad promuovendo il legame alle proteine 14-3-3 e sequestrandola nel citoplasma, prevenendo la translocazione mitocondriale e l'apoptosi.
• Bad è espressa in un'ampia varietà di tessuti, coerente con il suo ruolo fondamentale nella regolazione della morte cellulare programmata attraverso diversi tipi cellulari.

Guida Sperimentale e Suggerimenti Tecnici

• Poiché l'immunogeno è un fosfopeptide sintetico che comprende S112 della Bad umana, ci si aspetta che questo anticorpo riconosca specificamente la forma fosforilata in Ser-112; è consigliabile verificare la specificità fosforo-specifica utilizzando lisati trattati con fosfatasi o un anticorpo Bad non fosforo-specifico come controllo.
• Per l'analisi Western blot (WB), il peso molecolare previsto di Bad è 18 kDa; in condizioni ottimali dovrebbe essere rilevata una singola banda di circa questa dimensione, sebbene gli utenti debbano validare il segnale nel sistema di campioni pertinenti e nel flusso di lavoro sperimentale.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), le condizioni di recupero dell'antigene e di blocco devono essere ottimizzate empiricamente; la localizzazione prevista è mitocondriale e citoplasmatica, quindi i modelli di colorazione devono essere valutati di conseguenza.
• Nelle applicazioni ELISA, questo anticorpo può essere utilizzato per la cattura o il rilevamento della Bad fosforilata in lisati cellulari o tissutali; si consiglia di validare le condizioni del saggio con appropriati controlli positivi e negativi.
• Data la reattività crociata con la Bad di topo e ratto, questo anticorpo è adatto per studi su questi comuni organismi modello; tuttavia, gli utenti devono confermare che la sequenza attorno a S112 sia conservata in queste specie.

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