Anticorpo policlonale coniglio Phospho-BRD4 (S492/S494) per WB, DB, ELISA - O60885

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di BRD4

• BRD4 è un membro della famiglia bromodominio e extraterminale (BET), funziona come lettore della cromatina che lega gli istoni acetilati per trasmettere la memoria epigenetica attraverso le divisioni cellulari. Riferimenti correlati: PMID:20871596, PMID:23086925, PMID:23317504
• Rimane associato alla cromatina acetilata per tutto il ciclo cellulare, mantenendo la struttura della cromatina di ordine superiore per la trascrizione genica nella fase G1 postmitotica. Riferimenti correlati: PMID:22334664, PMID:23317504, PMID:23589332
• BRD4 recluta il complesso P-TEFb sui promotori genici e gli enhancer distali, portando alla fosforilazione del CTD della RNA polimerasi II e all'attivazione della trascrizione indotta da segnali. Riferimenti correlati: PMID:16109376, PMID:16109377, PMID:19596240
• Inoltre recluta P-TEFb sulla RELA acetilata, collegando BRD4 all'attivazione della via NF-kappa-B. Riferimenti correlati: PMID:19103749
• La fosforilazione a carico di residui come S492 e S494 da parte di CK2 facilita l'interazione di BRD4 con i promotori bersagliati da p53/TP53. Riferimenti correlati: PMID:23317504
• Nella risposta al danno del DNA, BRD4 agisce come isolatore della cromatina reclutando la condensin-2 sugli istoni acetilati, limitando la diffusione della fosforilazione di H2A.X.
• BRD4 si localizza nel nucleo e nei cromosomi; è espresso ubiquitariamente e subisce splicing alternativo e modifiche post-traduzionali tra cui fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione.
• Inoltre, BRD4 regola la differenziazione dei linfociti T CD4+ in cellule Th17 (Per similarità).

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Per Western blot, preparare i lisati con inibitori delle fosfatasi per preservare la fosforilazione e utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6–8%) per una separazione ottimale della proteina BRD4 di ~152 kDa.
• I saggi Dot blot e ELISA possono beneficiare di un bloccaggio con BSA privo di fosfati per ridurre il fondo; confermare la specificità utilizzando la competizione con peptide non fosforilato.
• La reattività dell'anticorpo su campioni umani suggerisce il suo utilizzo con linee cellulari umane; validare la reattività incrociata nel vostro sistema bersaglio se necessario.
• Considerare l'utilizzo di controlli positivi appropriati, come lisati da cellule trattate con inibitori delle fosfatasi o noti induttori di fosforilazione.

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