Phospho-BRD4-T204 Rabbit mAb per WB, ELISA - O60885

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del BRD4

• BRD4 (Proteina contenente il dominio bromo 4, nota anche come HUNK1) è una proteina "reader" della cromatina che riconosce e si lega agli istoni acetilati, svolgendo un ruolo chiave nella memoria epigenetica e nella regolazione della trascrizione. Riferimenti correlati: PMID:20871515, PMID:23086925, PMID:23317504
• Rimane associato alla cromatina acetilata durante tutto il ciclo cellulare, fornendo memoria epigenetica per la trascrizione genica post-mitotica G1 preservando la struttura della cromatina. Riferimenti correlati: PMID:22334664, PMID:23317504, PMID:23589332
• Durante l'interfase, BRD4 regola la trascrizione dei geni inducibili da segnali reclutando il complesso P-TEFb ai promotori e agli enhancer distali, spesso in collaborazione con JMJD6, spostando regolatori negativi come HEXIM1 e 7SKsnRNA. Riferimenti correlati: PMID:16109376, PMID:16109377, PMID:19596240
• BRD4 si lega anche alla RELA acetilata, attivando la segnalazione NF-kappa-B reclutando P-TEFb. Riferimenti correlati: PMID:19103749
• Seguendo la fosforilazione da parte di CK2, BRD4 viene reclutato ai promotori bersaglio di p53/TP53, regolando la trascrizione mediata da p53. Riferimenti correlati: PMID:23317504
• Nella risposta al danno al DNA, BRD4 agisce come un isolatore di cromatina reclutando il complesso condensina-2, inibendo così la segnalazione del danno al DNA e limitando la diffusione della fosforilazione H2AX.
• Espresso ubiquitariamente, BRD4 si localizza nel nucleo e sui cromosomi e subisce varie modificazioni post-traduzionali tra cui fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per il Western blot (WB), utilizzare un protocollo standard SDS-PAGE con gel all'8% o a gradiente per risolvere efficacemente la proteina BRD4 di ~152 kDa. Includere inibitori delle fosfatasi nei tamponi di lisi per preservare la fosforilazione a T204.
• Validare la specificità dell'anticorpo testando la competizione con peptide non fosforilato o il trattamento con fosfatasi.
• Per l'ELISA, considerare l'uso di peptidi fosforilati e non fosforilati per valutare la specificità; ottimizzare la concentrazione di rivestimento.

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