Phospho-CDK1-T161 Rabbit pAb - P06493

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CDK1

• CDK1 (noto anche come CDC2) è una serina/treonina chinasi essenziale per la transizione G2-M nel ciclo cellulare, fosforilando numerosi substrati per guidare gli eventi mitotici. Riferimenti correlati: PMID:16407259, PMID:16933150, PMID:17459720
• La sua attivazione richiede la fosforilazione a Thr161 da parte del complesso chinasi attivatrice dei CDK (CAK), mentre la fosforilazione inibitoria a Thr14 e Tyr15 da parte di WEE1 e PKMYT1 la mantiene inattiva; la defosforilazione da parte delle fosfatasi CDC25 innesca l'ingresso in mitosi. Riferimenti correlati: PMID:18480403, PMID:20360007, PMID:2188730, PMID:41100585
• CDK1 fosforila le lamine nucleari (LMNA, LMNB1, LMNB2) causando la rottura dell'involucro nucleare durante la mitosi. Riferimenti correlati: PMID:2188730, PMID:2344612, PMID:37788673
• In caso di danni al DNA, CDK1 viene inattivato tramite PKR/WEE1 per imporre l'arresto in G2 e riattivato dopo la riparazione attraverso la segnalazione WIP1/CDC25. Riferimenti correlati: PMID:20360007, PMID:20395957
• CDK1 si localizza in più compartimenti subcellulari, tra cui il nucleo, il citoplasma, i mitocondri, il centrosoma e il fuso mitotico, consentendo il coordinamento di diversi processi mitotici.
• CDK1 partecipa alla regolazione dell'orologio circadiano fosforilando NR1D1, segnalandolo per la degradazione; agisce anche come recettore per l'ingresso del virus dell'epatite C negli epatociti. Riferimenti correlati: PMID:27238018

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Dato che questo anticorpo mira a un sito di fosforilazione (Thr161), mantenere lo stato di fosforilazione durante la preparazione del campione includendo inibitori delle fosfatasi ed evitando il riscaldamento in tamponi privi di fosfato.
• Per il Western blot, è prevista una banda a circa 34 kDa; considerare l'uso di lisati di cellule mitotiche (es. cellule bloccate in G2/M) come controllo positivo e il trattamento con lambda fosfatasi come controllo negativo.
• Nell'immunoprecipitazione, le prestazioni dell'anticorpo possono dipendere dall'abbondanza dell'epitopo fosforilato; arricchire le cellule mitotiche per migliorare il rilevamento.
• Per l'immunofluorescenza e l'IHC, il recupero standard dell'antigene abbinato a una fissazione rapida può preservare il segnale di fosforilazione; si consiglia di condurre esperimenti pilota per ottimizzare il rilevamento.
• Sebbene elencato per ELISA, potrebbe essere richiesto il rivestimento diretto dell'antigene con il peptide fosforilato; può essere progettato un ELISA competitivo per quantificare i livelli di fosforilazione.

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