Anticorpo monoclonale di coniglio Phospho-CDK1-T161+CDK2/CDK3-T160 per WB, IP, IF - P06493

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CDK1

• La chinasi dipendente da ciclina 1 (CDK1, nota anche come CDC2/p34) è una serina/treonina chinasi altamente conservata che agisce da regolatore principale del ciclo cellulare eucariotico, guidando la transizione G2-M e coordinando l'ingresso e la progressione mitotica (PubMed:16407259, PubMed:16933150, PubMed:17459720). Riferimenti correlati: PMID:16407259 PMID:16933150 PMID:17459720
• L'attività di CDK1 è strettamente controllata dal legame con le cicline e dalla fosforilazione: l'attivazione richiede la fosforilazione della T161 da parte del complesso chinasi attivatore di CDK (CAK, CDK7/ciclina H/MAT1), mentre la fosforilazione inibitoria a livello di T14 e Y15 è mediata da WEE1 e PKMYT1; la defosforilazione da parte delle fosfatasi CDC25 al confine G2-M innesca l'attivazione improvvisa (PubMed:18480403, PubMed:20360007, PubMed:2188730). Riferimenti correlati: PMID:18480403 PMID:20360007 PMID:2188730
• Una volta attivata, CDK1 fosforila oltre un centinaio di substrati a valle per orchestrare gli eventi mitotici, tra cui la fosforilazione delle lamine che porta alla rottura dell'involucro nucleare, la fosforilazione delle proteine associate ai microtubuli per l'assemblaggio del fuso mitotico e la fosforilazione dell'istone H1 per la condensazione dei cromosomi (PubMed:2188730, PubMed:2344612, PubMed:37788673). Riferimenti correlati: PMID:2188730 PMID:2344612 PMID:37788673
• Subcellolarmente, CDK1 si localizza dinamicamente nel nucleo, nel citoplasma, nei mitocondri, nei centrosomi e nel fuso mitotico, riflettendo i suoi diversi ruoli funzionali durante la progressione del ciclo cellulare.
• CDK1 regola anche fattori di trascrizione (ad esempio FOXO1), proteine apoptotiche (ad esempio Bcl-xL, caspasi 8) e modificatori epigenetici (ad esempio EZH2), collegando il controllo del ciclo cellulare alle decisioni sul destino cellulare e alle risposte al danno del DNA (PubMed:18356527, PubMed:19917720, PubMed:20937773, PubMed:20935635). Riferimenti correlati: PMID:18356527 PMID:19917720 PMID:20937773 PMID:20935635
• CDK1 è essenziale per lo sviluppo embrionale precoce e la sua disregolazione è frequentemente osservata nel cancro, dove può essere sovraespressa o iperattivata, contribuendo alla proliferazione incontrollata (PubMed:18480403, PubMed:20360007). Riferimenti correlati: PMID:18480403 PMID:20360007
• Inoltre, CDK1 funge da recettore per l'ingresso del virus dell'epatite C (HCV) negli epatociti, suggerendo un ruolo oltre la regolazione del ciclo cellulare.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico che bersaglia la T161 fosforilata della CDK1 umana, un residuo conservato nell'anello di attivazione. Si prevede che l'anticorpo riconosca la forma attivata (fosforilata sulla T161) di CDK1 e potenzialmente reagisca in modo incrociato con la T160 fosforilata di CDK2 e CDK3 per omologia di sequenza.
• Per il Western blotting, trattare i lisati cellulari con inibitori di fosfatasi per preservare lo stato di fosforilazione. Il peso molecolare previsto è ~34 kDa; monitorare gli spostamenti delle bande o le variazioni di intensità dopo il trattamento con fosfatasi per confermare la fosfospecificità.
• Nell'immunoprecipitazione, il pre-chiarimento con un IgG di controllo e l'uso di condizioni di lisi non denaturanti possono migliorare la rilevazione dei complessi di CDK1.
• Per immunofluorescenza e immunoistochimica, i metodi di permeabilizzazione e fissazione devono essere ottimizzati; l'anticorpo può rilevare pattern di colorazione nucleare, citoplasmatica e centrosomale a seconda della fase del ciclo cellulare.
• Le applicazioni di Dot blot e ELISA possono essere utilizzate per lo screening ad alto rendimento dei livelli di CDK1 fosforilato nei campioni.

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