Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Phospho-CEBPB (T235) per WB, IHC-P, ELISA - P17676

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CEBPB

• CEBPB (C/EBP-beta, NF-IL6, TCF-5) è un membro della famiglia di fattori di trascrizione CCAAT/enhancer-binding protein e funge da regolatore critico delle risposte immunitarie e infiammatorie, dell'adipogenesi, della rigenerazione epatica e dell'ematopoiesi. Riferimenti correlati: PMID:12048245, PMID:1741402, PMID:18647749

• La proteina si lega al motivo di consenso del DNA 5'-T[TG]NNGNAA[TG]-3' e regola la trascrizione di geni della fase acuta e di citochine, svolgendo un ruolo centrale nella risposta infiammatoria e nell'uccisione di batteri intracellulari.

• Durante l'adipogenesi, CEBPB viene espresso rapidamente e dopo la fosforilazione induce CEBPA e PPARG, che guidano l'espressione di geni specifici degli adipociti. La transattivazione ritardata sembra necessaria per consentire l'espansione clonale mitotica e la differenziazione terminale. Riferimenti correlati: PMID:20829347

• L'isoforma LIP funge da regolatore dominante-negativo tramite eterodimerizzazione con l'isoforma LAP. CEBPB promuove anche la differenziazione degli osteoblasti e l'osteoclastogenesi. Riferimenti correlati: PMID:11741938

• CEBPB è localizzato principalmente nel nucleo, ma può essere rilevato anche nel citoplasma, in linea con il suo ruolo di "shuttling" nell'attivazione trascrizionale dipendente da segnale.

• Modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, acetilazione, metilazione e ubiquitinazione, ne modulano l'attività trascrizionale e la stabilità proteica.

• L'espressione tissutale è ampia ma bassa; livelli rilevabili si osservano in polmone, rene e milza.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo monoclonale di coniglio ricombinante è stato generato contro un peptide sintetico fosforilato intorno alla treonina 235. Confermare la specificità per la fosforilazione mediante trattamento dei campioni con fosfatasi o mediante inibizione competitiva con peptide non fosforilato nel vostro sistema di saggio.
• Per il Western blot, aspettarsi una banda principale intorno a 36 kDa. Utilizzare lisati preparati al momento e inibitori delle fosfatasi per preservare il segnale di fosforilazione. Ottimizzare le condizioni di blocco e incubazione con l'anticorpo per minimizzare il legame aspecifico.
• Nelle applicazioni IHC-P, il metodo di recupero dell'antigene e le condizioni di fissazione possono influenzare l'integrità dell'epitopo fosforilato. Considerare di testare tessuti di controllo positivo noti, come macrofagi stimolati con lipopolisaccaride (LPS) o adipociti in differenziazione, per validare la colorazione.
• Per l'ELISA, includere controlli con peptide sia fosforilato che non fosforilato per stabilire la specificità e l'intervallo dinamico del saggio.

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