Anticorpo policlonale di coniglio Phospho-Chk1-S317 (WB, ELISA) - O14757

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Chk1

• La serina/treonina chinasi proteica Chk1 (CHEK1) è una chinasi critica del punto di controllo del ciclo cellulare che garantisce l'integrità del genoma mediando l'arresto del ciclo cellulare e la riparazione del DNA in caso di danni al DNA o stress replicativo. Riferimenti correlati: PMID:11535615, PMID:12399544, PMID:12446774
• Chk1 fosforila CDC25A, CDC25B e CDC25C, portando alla loro inibizione tramite il legame con 14-3-3 o il degrado proteasomico, impedendo così l'attivazione del CDK-ciclina e bloccando la progressione del ciclo cellulare. Riferimenti correlati: PMID:12676583, PMID:12676925, PMID:12759351, PMID:9278511, PMID:19734889, PMID:20090422
• Fosforila direttamente RAD51 in Thr-309 per promuovere la riparazione per ricombinazione omologa, TP53 in più siti C-terminali per potenziarne l'attivazione e l'arresto del ciclo cellulare, e FANCE per facilitare la riparazione dei cross-link del DNA. Riferimenti correlati: PMID:15665856, PMID:10673501, PMID:15659650, PMID:16511572, PMID:17296736
• Chk1 fosforila TLK1 in Ser-743, impedendo la fosforilazione di ASF1A e migliorando l'assemblaggio della cromatina, e regola anche PCNA per il mantenimento della forca di replicazione. Riferimenti correlati: PMID:12660173, PMID:12955071, PMID:18451105
• Inoltre, Chk1 fosforila l'istone H3.1 (H3T11ph) per silenziare epigeneticamente i geni, fosforila RB1 per promuovere l'interazione con E2F e prende di mira SPRTN e PABIR1/FAM122A per modulare lo stress replicativo e il punto di controllo G2/M. Riferimenti correlati: PMID:17380128, PMID:31316063, PMID:33108758
• Una variante di splicing endogena agisce come repressore della Chk1 a lunghezza intera, antagonizzandone la funzione per promuovere la transizione da S a G2/M.
• A livello subcellulare, Chk1 si localizza nel nucleo, nei cromosomi, nel citoplasma e nei centrioli, con un arricchimento al centrosoma durante la mitosi.
• Espressa in modo ubiquitario, con i livelli più alti nel timo, nei testicoli, nell'intestino tenue e nel colon.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico attorno alla Ser317; assicurarsi che la preparazione del campione includa inibitori delle fosfatasi per preservare la fosforilazione endogena in questo sito.
• Per il Western blotting, è prevista una banda specifica a ~54 kDa. Validare la specificità trattando i lisati cellulari con lambda fosfatasi o utilizzando anticorpi Chk1 non specifici per la fosforilazione come controlli.
• Nell'ELISA, utilizzare peptide immobilizzato o lisati cellulari e considerare il blocco con peptidi fosforilati rispetto a quelli non fosforilati per confermare la specificità fosfo-specifica.
• Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo per il proprio sistema sperimentale specifico; le diluizioni di partenza tipiche per WB sono 1:500–1:2000, ma si consiglia una determinazione empirica.
• La reattività crociata è stata confermata per campioni umani; per altre specie, verificare l'omologia di sequenza attorno alla Ser317 e testare sperimentalmente.

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