PAb coniglio Phospho-DNA-PKcs-S2056 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P78527

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della DNA-PKcs

• La DNA-PKcs (PRKDC) rappresenta la subunità catalitica del complesso della proteinasi DNA-dipendente, agisce come sensore molecolare per il danno del DNA e svolge un ruolo centrale nella riparazione per unione non omologa delle estremità (NHEJ) delle rotture a doppio filamento e nella ricombinazione V(D)J. Riferimenti correlati: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805
• Si localizza alle estremità dei cromosomi, contribuendo al mantenimento della stabilità telomerica e alla prevenzione della fusione delle estremità cromosomiche.
• Oltre alla riparazione del DNA, la DNA-PKcs modola la trascrizione, promuove la biogenesi dei ribosomi processando l'rRNA precursore e regola le risposte immunitarie innate attraverso la via cGAS-STING. Riferimenti correlati: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805 PMID:32103174 PMID:28712728 PMID:33273464 PMID:35460603
• Fosforila la Ser-139 dell'istone H2AX, un evento chiave nella risposta al danno del DNA, e numerosi altri substrati tra cui p53, AKT, XRCC4 e WRN, influenzando quindi l'apoptosi e la segnalazione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:14627815 PMID:16046194 PMID:10026262 PMID:10467406 PMID:11889123 PMID:15262962
• È una proteina prevalentemente nucleare; la DNA-PKcs si trova anche nel nucleolo e nel citosol, il che riflette i suoi diversi ruoli funzionali.
• È soggetta a fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione; le mutazioni nel gene PRKDC sono associate all'immunodeficienza combinata grave (SCID).

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico che comprende la Ser2056 della DNA-PKcs umana, progettato per garantire la specificità per lo stato di fosforilazione. Includere controlli appropriati non fosforilati durante la validazione.
• Per Western blot, a causa del peso molecolare molto elevato della DNA-PKcs (469 kDa), si consiglia di utilizzare gel a bassa percentuale (ad esempio 4–8%) e tempi di trasferimento prolungati. Utilizzare marcatori precolorati ad alto peso molecolare per una visualizzazione chiara.
• Nell'immunofluorescenza o nell'immunoistochimica, è prevista una forte colorazione nucleare insieme a possibili segnali nucleolari e citoplasmatici. Ottimizzare i protocolli di fissazione e permeabilizzazione per preservare l'epitopo fosforilato.
• La reattività crociata è riportata per l'uomo; se si testano altre specie, confermare l'omologia di sequenza intorno alla Ser2056 ed eseguire un esperimento pilota.

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