Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-EGFR-Y869 per WB e ELISA - P00533

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'EGFR

• EGFR è un recettore tirosin chinasi che si lega ai ligandi della famiglia EGF (inclusi EGF, TGF-alfa, AREG, epigen, betacellulina, epiregulina e HBEGF), portando alla dimerizzazione del recettore e all'autofosforilazione. Riferimenti correlati: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960 PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029

• L'EGFR attivato dai ligandi innesca molteplici cascate di segnalazione intracellulare, inclusi i moduli RAS-RAF-MEK-ERK, PI3 chinasi-AKT, PLCgamma-PKC e STAT, nonché la segnalazione NF-kappa-B. Riferimenti correlati: PMID:27153536 PMID:11116146

• EGFR fosforila direttamente altre proteine come RGS16 (aumentando la sua attività GTPasi) e MUC1 (promuovendo la sua interazione con SRC e beta-catenina), collegandosi alle vie delle proteine G e dell'adesione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:11602604 PMID:11483589

• EGFR regola positivamente la migrazione cellulare interagendo con CCDC88A/GIV, che trattiene EGFR sulla membrana cellulare e sostiene la segnalazione. Riferimenti correlati: PMID:20462955

• Il gene EGFR (noto anche come ERBB1, HER1) codifica un recettore tirosin chinasi che appartiene alla famiglia ERBB; una isoforma generata per splicing alternativo (isoforma 2) può agire come antagonista dell'azione dell'EGF ed è espressa nei tumori ovarici.

• EGFR è localizzato prevalentemente sulla membrana cellulare, ma viene rilevato anche nel reticolo endoplasmatico, nell'apparato di Golgi, nella membrana nucleare, negli endosomi e può essere secreto.

• EGFR è una fosfoproteina con siti chiave di fosforilazione della tirosina (inclusi Y869) che regolano la sua attività chinasi, e subisce glicosilazione, ubiquitinazione e altre modifiche post-traduzionali.

• Espresso ubiquitariamente nei tessuti umani; EGFR agisce come recettore cellulare ospite per il virus dell'epatite C (HCV), facilitando l'ingresso virale negli epatociti.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico corrispondente ai residui attorno a Y869 dell'EGFR umano. Per confermare la fosfo-specificità, includere controlli trattati con fosfatasi o competere con peptide non fosforilato.
• Per il western blot, utilizzare lisati cellulari stimolati con EGF e prevedere una banda a ~134 kDa; è riportata la reattività crociata con EGFR di topo e ratto, ma validare nella specie di interesse.
• Per ELISA, considerare il rivestimento con un peptide fosforilato e l'ottimizzazione delle condizioni di blocco e rilevamento per migliorare il rapporto segnale-rumore.
• Evitare condizioni di stripping troppo severe quando si ripetono le analisi sui blot, in quanto ciò potrebbe rimuovere il segnale fosfo-specifico.

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