Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Phospho-eIF4EBP1-T37/T46 per WB ed ELISA - Q13541

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (Proteina legante il fattore di inizio della traduzione eucariotico 4E 1), anche nota come PHAS-I, è un repressore chiave dell'inizio della traduzione.
• Regola l'attività di EIF4E competendo con EIF4G1/EIF4G3 per il legame a EIF4E. Nel suo stato ipofosforilato, lega strettamente EIF4E e inibisce la traduzione cap-dipendente. L'iperfosforilazione, in risposta a segnali di crescita, causa il distacco da EIF4E, permettendo l'assemblaggio del complesso eIF4F e l'inizio della traduzione.
• Funziona come effettore a valle delle vie di segnalazione mTORC1 e MAP chinasi, mediando la sintesi proteica in risposta a ormoni, fattori di crescita e nutrienti.
• Si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo, in linea con il suo ruolo nella modulazione della traduzione e possibilmente in funzioni nucleari.
• Subisce estese modificazioni post-traduzionali tra cui fosforilazione (es. in T37, T46, T70, S65), acetilazione e ubiquitinazione (notate come legame isopeptidico e coniugazione Ubl), che collettivamente ne regolano attività e stabilità.
• Peso molecolare approssimativamente 13 kDa (12580 Da) come determinato dalla sequenza, sebbene la migrazione in SDS-PAGE possa variare a causa degli stati di fosforilazione.
• Classificato come inibitore della sintesi proteica, fosfoproteina, e appartiene alla famiglia della regolazione della traduzione; identificato anche in studi di proteomica come componente del proteoma di riferimento.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo riconosce i livelli endogeni di eIF4EBP1 solo quando fosforilato in Thr37 e Thr46.
• Per il Western blot, includere inibitori delle fosfatasi nei buffer di lisi per preservare i segnali di fosforilazione. La banda principale tipicamente migra intorno a 13-20 kDa; possono apparire bande multiple a causa della fosforilazione differenziale.
• Convalidare il segnale fosfo-specifico trattando le cellule con stimoli (es. insulina, siero) per indurre la fosforilazione, e opzionalmente utilizzare un trattamento con fosfatasi o competizione con peptide non fosforilato.
• Per l'ELISA, ottimizzare le condizioni di rivestimento e la concentrazione dell'anticorpo; considerare l'accoppiamento con un anticorpo anti-eIF4EBP1 totale per la normalizzazione.
• La reattività crociata è stata dimostrata in umano e ratto; per il topo, nonostante l'omologia di sequenza, la reattività non è elencata nei dati di cross-reattività; potrebbe essere necessaria una validazione su campioni di topo.

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