Anticorpo policlonale di coniglio contro Phospho-ERK1-T202 + ERK2-T185 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P28482 / P27361

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ERK1/ERK2

• ERK2 (MAPK1, nota anche come p42-MAPK) e ERK1 (MAPK3, p44-MAPK) sono le due principali chinasi attivate da mitogeni che costituiscono il nucleo della cascata di segnalazione MAPK/ERK, trasmettendo segnali extracellulari per regolare il destino cellulare.
• La via MAPK/ERK controlla un ampio spettro di processi cellulari tra cui proliferazione, differenziazione, adesione, sopravvivenza e apoptosi, tramite fosforilazione di oltre 160 substrati a valle, come fattori di trascrizione (ad esempio ELK1, FOS, ATF2), protein chinasi (ad esempio RSK, MSK, MNK) e regolatori del citoscheletro.
• Dopo l'attivazione, ERK1/2 fosforila GLI1 per promuoverne la dissociazione da SUFU e la traslocazione nucleare, modulando positivamente la segnalazione di smoothened.
  Riferimenti correlati: PMID:35831023
• In risposta all'ipossia, ERK2 fosforila la fosfoglicerato chinasi PGK1, indirizzandola al mitocondrio per sopprimere la produzione di acetil-CoA da piruvato.
  Riferimenti correlati: PMID:26942675
• La chinasi si localizza in più compartimenti subcellulari: citoplasma, nucleo, citoscheletro (fuso, centrosoma), adesioni focali e caveole della membrana, consentendo una segnalazione dipendente dal contesto.
• L'attivazione richiede la doppia fosforilazione nel motivo Thr-Glu-Tyr (T185 e Y187 in ERK2; T202 e Y204 in ERK1) da parte delle chinasi MEK a monte; questo anticorpo rileva specificamente le forme T185 (ERK2) e T202 (ERK1) fosforilate.
• Oltre all'attività chinasi, ERK2 funziona anche come repressore trascrizionale legandosi agli elementi promotori ricchi di GC indipendentemente dalla sua attività catalitica, modulando i geni responsivi all'interferone.
• Parole chiave: Acetilazione, Splicing alternativo, Apoptosi, Legame ATP, Ciclo cellulare, Giunzione cellulare, Citoplasma, Citoscheletro, Legame al DNA, Interazione ospite-virus, Chinasi, Membrana, Legame nucleotidico, Nucleo, Fosfoproteina, Repressore, Serina/treonina protein chinasi, Trascrizione, Regolazione della trascrizione, Coniugazione Ubl.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per preservare la fosforilazione durante la preparazione del campione, aggiungere inibitori delle fosfatasi ai buffer di lisi ed evitare una manipolazione prolungata del campione a temperatura ambiente.
• Validare la specificità dell'anticorpo trattando i lisati cellulari con lambda protein fosfatasi; si prevede la perdita completa del segnale in Western blot.
• In IHC-P, ottimizzare le condizioni di recupero dell'antigene (ad esempio, tampone citrato pH 6.0) e prendere in considerazione l'uso di un protocollo di amplificazione del segnale fosfo-specifico per migliorare la rilevazione di target fosforilati a bassa abbondanza.
• Per IF/ICC, fissare le cellule con formaldeide e permeabilizzarle con metanolo; confermare la colocalizzazione con marcatori subcellulari noti (ad esempio, DAPI nucleare, marcatori del Golgi) in base alla localizzazione prevista dopo stimolazione.
• Bande attese: ~38–43 kDa per le isoforme di ERK1/ERK2; possono comparire più bande a causa degli stati di fosforilazione o delle varianti di splicing.

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