Anticorpo policlonale coniglio Phospho-ESRα-S167 per WB, IF/ICC, ELISA - P03372

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del recettore alfa per gli estrogeni

• Il recettore alfa per gli estrogeni (ER-alfa), codificato dal gene ESR1, è un recettore per ormoni steroidei membro della sottofamiglia 3 gruppo A dei recettori nucleari (NR3A1). Funge da fattore di trascrizione attivato da ligando, regolando l'espressione genica critica per la proliferazione e la differenziazione cellulare nei tessuti bersaglio.
• Dopo il legame con l'estrogeno, l'ER-alfa subisce un cambiamento conformazionale che facilita l'omodimerizzazione e il legame con gli elementi di risposta agli estrogeni (ERE) presenti nel DNA. Interagisce inoltre con altri fattori di trascrizione come AP-1 (c-Jun/c-Fos) e Sp1 per mediare la segnalazione indipendente dagli ERE. I complessi coattivatori vengono reclutati tramite i motivi LXXLL.
• Lo splicing alternativo e l'uso di diversi promotori producono isoforme che mancano di uno o più domini funzionali. Queste isoforme possono modulare l'attività trascrizionale del recettore a lunghezza completa tramite legame competitivo al DNA o al ligando, oppure tramite eterodimerizzazione. Riferimenti correlati: PMID:10970861
• L'ER-alfa si sposta tra nucleo, citoplasma e membrana cellulare. È anche associato all'apparato di Golgi, consentendo sia vie di segnalazione genomiche sia rapide vie non genomiche, inclusa l'attivazione delle cascate chinasi.
• Il recettore è soggetto a molteplici modifiche post-traduzionali tra cui fosforilazione, glicosilazione, palmitoilazione e coniugazione ubiquitino-simile. Contiene motivi a dito di zinco e un dominio di legame per il ligando, con un peso molecolare di circa 66 kDa.
• L'ER-alfa è ampiamente espresso nei tessuti umani ma è notoriamente assente nella ghiandola pituitaria. Riferimenti correlati: PMID:10970861
• Ruoli funzionali specifici includono il mantenimento della sopravvivenza neuronale in caso di danno da ischemia-riperfusione in presenza di estradiolo e l'attivazione di NOS3 per promuovere la produzione di ossido nitrico endoteliale. Riferimenti correlati: PMID:21937726
• L'ER-alfa partecipa anche alla transrepression reciproca con NF-kappa-B, modulando le risposte infiammatorie. Inoltre, media la regolazione trascrizionale dipendente da MTA1 di BRCA1 e BCAS3. Riferimenti correlati: PMID:17922032

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico fosforilato intorno alla Serina 167. Utilizzare inibitori delle fosfatasi durante la preparazione dei campioni per preservare la fosforilazione.
• Per il western blotting, la dimensione prevista della banda è ~66 kDa. Validare la rilevazione in linee cellulari umane note per esprimere ER-alfa, come MCF-7.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, aspettarsi una localizzazione nucleare, citoplasmatica e di membrana. Eseguire una colorazione concomitante con marcatori di compartimento per confermare la specificità.
• Essendo un anticorpo policlonale, la coerenza tra lotti può variare; includere controlli positivi e negativi e considerare l'uso di un peptide bloccante per verificare la fosfospecificità.
• Sebbene l'anticorpo sia reattivo con campioni umani, la reattività crociata con altre specie non è stata testata; si raccomanda una validazione empirica se utilizzato per ortologhi.
• Per ELISA, un antigene di coating costituito da peptide fosforilato può aiutare a calibrare la sensibilità di rilevazione.

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