Anticorpo Policlonale di Coniglio Fosfo-FOXO3A-S425 per WB, IHC-P, ELISA - O43524

Specifiche e Parametri del Prodotto Principale

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Proteina Forkhead box O3

• La proteina Forkhead box O3 (FOXO3A), nota anche come proteina AF6q21 o Forkhead in rabdomiosarcoma-like 1 (FKHRL1), è un fattore di trascrizione ubiquitariamente espresso codificato dal gene FOXO3 (gene umano ID 2309).
• FOXO3A agisce come attivatore trascrizionale che riconosce il consenso di DNA 5'-[AG]TAAA[TC]A-3', regolando processi chiave come l'apoptosi e l'autofagia. Riferimenti correlati: PMID:10102273, PMID:16751106, PMID:21329882
• In risposta alla carenza di nutrienti, FOXO3A entra nel nucleo dopo defosforilazione e regola positivamente i geni dell'autofagia (es. GABARAP1L, MAP1LC3B, ATG12), promuovendo la degradazione proteica del muscolo scheletrico.
• FOXO3A innesca l'apoptosi in assenza di fattori di sopravvivenza, causando in particolare la morte delle cellule neuronali sotto stress ossidativo. Riferimenti correlati: PMID:10102273, PMID:16751106
• In seguito alla fosforilazione da parte di MAPKAPK5, FOXO3A induce miR-34b e miR-34c, che sopprimono post-trascrizionalmente l'espressione dell'oncogene MYC. Riferimenti correlati: PMID:21329882
• FOXO3A si sposta tra il citoplasma e il nucleo, e sotto stress metabolico si trasloca nella matrice mitocondriale e nella membrana esterna per potenziare la trascrizione del mtDNA. Riferimenti correlati: PMID:23283301
• Le principali modificazioni post-traduzionali includono fosforilazione (es. in Ser425), acetilazione, metilazione e ubiquitinazione, che governano la sua attività, localizzazione e stabilità.
• FOXO3A è coinvolto nella differenziazione delle cellule T regolatorie attivando l'espressione di FOXP3, e nell'impegno condrogenico dei progenitori scheletrici in condizioni di basso contenuto lipidico. Riferimenti correlati: PMID:30513302

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico fosforilato che circonda la serina 425; per preservare questa modifica labile, aggiungere inibitori delle fosfatasi durante la preparazione del campione.
• Per il Western blot (WB), considerare di caricare un controllo positivo come il lisato di cellule trattate con un induttore della fosforilazione di FOXO3A (es. stress ossidativo o privazione di siero) e validare la specificità della banda con un campione trattato con fosfatasi.
• L'immunoistochimica (IHC‑P) potrebbe richiedere un'ottimizzazione del recupero dell'antigene; includere un passaggio di blocco con considerazioni fosfo-specifiche per ridurre il legame aspecifico.
• I protocolli ELISA dovrebbero utilizzare le condizioni di rivestimento consigliate e includere una curva standard; la reattività crociata tra umano, topo e ratto suggerisce che l'epitopo è conservato, ma confermare sempre le prestazioni nella matrice di interesse.
• Il peso proteico è di circa 71 kDa; verificare il rilevamento alla dimensione attesa e tenere conto di un possibile shift dovuto a modificazioni post-traduzionali.

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