pAb coniglio anti Phospho-Histone H3-T3 per WB, ELISA - Q16695 / P68431

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3

• Istione H3.1t (indicato anche come H3/g o H3.4) è una variante specifica del testicolo dell'istone H3 canonico. È codificato dal gene H3-4 (HIST3H3) e appartiene alla grande famiglia degli istoni H3, che include anche geni aggiuntivi come HIST1H3A.
• Come istone centrale, H3 si assembla con H2A, H2B e H4 nell'ottamero di istoni che forma il nucleosoma, l'unità ripetitiva fondamentale della cromatina. I nucleosoma impacchettano il DNA in una struttura compatta che limita l'accesso all'informazione genetica.
• Questa compattazione svolge un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, della replicazione del DNA, della riparazione del DNA e della stabilità cromosomica generale. L'apertura o il rimodellamento controllato dei nucleosomi permette ai macchinari cellulari di leggere, copiare o riparare il modello di DNA.
• La funzione degli istoni è regolata dinamicamente da una complessa serie di modifiche post-traduzionali sulle code N-terminali: il "codice istonico". Queste includono la fosforilazione (ad esempio su Thr-3), l'acetilazione, la metilazione e molte altre, che agiscono insieme per modulare lo stato della cromatina e reclutare proteine effettrici a valle.
• H3.1t si localizza esclusivamente nel nucleo ed è integrato nella cromatina. Coerentemente con il suo ruolo nell'impacchettamento del DNA, è strettamente associato ai cromosomi per tutto il ciclo cellulare.
• L'espressione di H3.1t è ampiamente limitata alle cellule testicolari, suggerendo una funzione specializzata nella riorganizzazione della cromatina durante la spermatogenesi. Altre varianti di H3 sono espresse in modo più ampio e svolgono ruoli nucleosomiali simili nelle cellule somatiche.
• Le parole chiave UniProt per H3.1t includono "Fosfoproteina", "Acetilazione", "Metilazione", "Citrullinazione" e "ADP-ribosilazione", che evidenziano l'ampio panorama di modifiche che regola le sue funzioni.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico che comprende la regione Thr-3 dell'HIST1H3A umano. Questo progetto è concepito per generare anticorpi che riconoscano specificamente la forma fosforilata dell'istone H3. I ricercatori devono confermare la specificità confrontando i segnali tra campioni trattati con fosfatasi e campioni non trattati.
• L'anticorpo è convalidato per Western blotting (WB) e ELISA. Per il WB, possono essere utilizzati lisati cellulari totali o estratti arricchiti di istoni, e ci si aspetta una banda vicino a 15 kDa. La migrazione può variare a seconda dello stato di modificazione di H3. Includere sempre inibitori di fosfatasi durante la lisi e la preparazione dei campioni per preservare il segnale di fosforilazione.
• Nell'ELISA, considerare di rivestire la piastra con il peptide fosforilato o la proteina istone fosforilata. Includere controlli appropriati (ad esempio non fosfopeptide) per valutare la specificità di legame.
• La reattività crociata prevista è ampia (umana, topo, ratto e altre) a causa dell'elevata conservazione della coda N-terminale di H3 tra i vertebrati. Tuttavia, si raccomanda la convalida nella specie e nel tessuto di interesse prima delle applicazioni quantitative.
• Per applicazioni immunoistochimiche o immunocitochimiche, si ricorda che l'anticorpo non è stato originariamente sviluppato per questi formati; è consigliabile un test pilota con condizioni appropriate di recupero dell'antigene e di rilevazione.

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