Anticorpo monoclonale coniglio Phospho-IκBα-S36 per WB, IHC-P, ELISA - P25963

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di IκBα

• IκBα (inibitore alfa di NF-kappa-B, noto anche come MAD3 o NFKBI) è una proteina regolatoria chiave che inibisce i fattori di trascrizione NF-κB trattenendo i dimeri RELA/p65 e NFKB1/p50 nel citoplasma mascherando i loro segnali di localizzazione nucleare. Riferimenti correlati: PMID:1493333 PMID:36651806 PMID:7479976

• Dopo la stimolazione cellulare da parte di segnali immunitari e pro-infiammatori, IκBα subisce la fosforilazione alle serine 32 e 36, che innesca la sua ubiquitinazione e la successiva degradazione proteasomica, liberando così i dimeri NF-κB che possono traslocare nel nucleo e attivare la trascrizione. Riferimenti correlati: PMID:7479976 PMID:7628694 PMID:7796813

• IκBα è un membro della famiglia degli inibitori IκB, caratterizzata da ripetizioni ankirina che mediano le interazioni proteina-proteina con i dimeri NF-κB.

• Subcellularmente, IκBα si sposta tra citoplasma e nucleo, ma la sua localizzazione predominante è citoplasmatica, dove sequestra i complessi inattivi di NF-κB.

• Le modifiche post-traduzionali di IκBα includono fosforilazione, ubiquitinazione (coniugazione Ubl), idrossilazione e formazione di legami isopeptidici, che regolano la sua stabilità e attività.

• Il gene NFKBIA è associato a displasia ectodermica e altre patologie immuni-correlate quando mutato, evidenziando il suo ruolo critico nell'omeostasi immunitaria.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico corrispondente alla regione intorno alla Ser36, e garantisce un'elevata specificità per la forma fosforilata. Per confermare la fosfo-specificità in WB si può utilizzare il blocco con peptide non fosforilato.
• Per il WB, si consiglia di stimolare le cellule (ad esempio con TNF-α o IL-1β) per indurre la fosforilazione e la degradazione di IκBα, che possono essere monitorate con questo anticorpo.
• In IHC-P, i protocolli di recupero dell'antigene e permeabilizzazione devono essere ottimizzati; convalidare la colorazione in sezioni di tessuto che sono note per esprimere la via di segnalazione NF-κB attivata.
• Per ELISA, utilizzare questo anticorpo come reagente di cattura o di rilevamento; la reattività crociata con IκBα non fosforilato deve essere valutata in base al formato del test.
• Poiché l'anticorpo reagisce con uomo, topo e ratto, è adatto per studi traslazionali in tutte queste specie; includere sempre controlli positivi e negativi appropriati.

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