Fosfo-IRAK4-Ser346 coniglio mAb per WB, ELISA - Q9NWZ3

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di IRAK4

• IRAK4 (chinasi 4 associata al recettore dell'interleuchina-1), nota anche come antigene del carcinoma renale NY-REN-64, è codificata dal gene IRAK4. Esistono diverse isoforme dovute allo splicing alternativo.
• IRAK4 è una chinasi serina/treonina essenziale per l'avvio delle risposte immunitarie innate contro i patogeni. Funziona a valle dei recettori Toll-like (TLR) e IL-1R, venendo reclutata rapidamente nel complesso Myddosome tramite MYD88. Riferimenti correlati: PMID:17878374
• All'attivazione, IRAK4 fosforila IRAK1, stimolando la sua attività chinasica e l'autofosforilazione. Fosforila anche le ligasi E3 ubiquitina Pellino (PELI1, PELI2, PELI3) per promuovere la poliubiquitinazione legata a K63 di IRAK1, portando all'attivazione dei complessi TAK1 e IKK e alla translocazione nucleare di NF-κB.
• IRAK4 fosforila anche TIRAP per promuovere la sua ubiquitinazione e degradazione, e fosforila NCF1 per regolare l'attività dell'ossidasi NADPH durante la stimolazione con LPS, contribuendo alle risposte antimicrobiche.
• Localizzata prevalentemente nel citoplasma.
• IRAK4 subisce fosforilazione e acetilazione, che sono critiche per la sua attivazione e funzione.
• Le mutazioni in IRAK4 sono associate a disturbi di immunodeficienza (es. IPD1, IMD67) e al carcinoma renale (NY-REN-64), evidenziando il suo ruolo nella difesa immunitaria e nel cancro.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Dato che questo anticorpo è specifico per la Ser346 fosforilata, includere inibitori delle fosfatasi durante la preparazione del campione per il western blot per preservare il segnale di fosforilazione.
• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico; considerare l'uso di un peptide non fosforilato come controllo negativo per confermare il legame dipendente dalla fosforilazione.
• Per il western blot, il peso molecolare previsto è di circa 52 kDa. Assicurarsi di un caricamento proteico adeguato e utilizzare controlli positivi appropriati, come cellule immunitarie stimolate.
• Per le applicazioni ELISA, sviluppare un protocollo di rilevamento fosfo-specifico; l'abbinamento con un anticorpo IRAK4 totale può consentire l'analisi rapportale dei livelli di fosforilazione.
• Validare l'anticorpo nel sistema di campioni umani pertinente, poiché la reattività crociata con altre specie non è stata determinata.
• Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo e le condizioni di incubazione per il proprio specifico impianto sperimentale.

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