pAb di coniglio contro Phospho-IRE1-S724 - O75460

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di IRE1

• IRE1 (noto anche come ERN1, IRE1α) è una serina/treonina-protein chinasio e endoribonucleasi a doppia funzione che agisce come sensore primario della risposta alle proteine non ripiegate (UPR) del reticolo endoplasmatico. Riferimenti correlati: PMID:11175748, PMID:11779464, PMID:12637535
• Nelle cellule non sottoposte a stress, IRE1 viene mantenuto in uno stato monomerico inattivo tramite legame con la chaperone del reticolo endoplasmatico HSPA5/BiP. Riferimenti correlati: PMID:21317875
• In seguito all'accumulo di proteine mal ripiegate, HSPA5/BiP si dissocia, permettendo l'omodimerizzazione di IRE1 e l'autofosforilazione trans del dominio chinasio, che attiva la funzione endoribonucleasica. Riferimenti correlati: PMID:21317875
• Il dominio endoribonucleasico taglia specificamente l'mRNA di XBP1, rimuovendo un introne di 26 nucleotidi per generare XBP1 splicato (XBP1s). Riferimenti correlati: PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• XBP1s codifica per un potente fattore di trascrizione che sovraregola i geni coinvolti nel ripiegamento proteico, nel controllo qualità e nella degradazione nel reticolo endoplasmatico, ripristinando l'omeostasi reticolare. Riferimenti correlati: PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• Oltre allo splicing di XBP1, IRE1 regola anche le vie di secrezione proteica non convenzionali, come il traffico indotto da stress reticolare di CFTR verso la membrana cellulare tramite GORASP2 e SEC16A. Riferimenti correlati: PMID:21884936, PMID:28067262
• IRE1 è espresso in modo ubiquitario, con livelli particolarmente elevati nel tessuto pancreatico, che riflette l'elevata domanda secretoria delle cellule pancreatiche.
• Come proteina di membrana del reticolo endoplasmatico, il dominio lumminale N-terminale di IRE1 sensa lo stress reticolare, mentre la regione citosolica C-terminale ospita le attività chinasica e endoribonucleasica.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Questo anticorpo è stato ottenuto contro un peptide fosforilato corrispondente alla regione S724 di IRE1α umana. Per verificare la fosfospecificità, si consiglia il trattamento con λ-fosfatasi dei campioni prima dell'analisi Western blot.
• Per il WB, IRE1 migra a circa 110 kDa. Assicurare un blocco completo della membrana e includere controlli positivi (lisati di cellule con stress reticolare) e negativi (cellule non sottoposte a stress) appropriati per confermare l'identità della banda.
• Nell'IHC-P, le condizioni di recupero dell'antigene possono richiedere ottimizzazione. Includere un controllo di isotipo e convalidare i pattern di colorazione rispetto alla distribuzione tissutale nota di IRE1.
• La reattività incrociata con IRE1 di topo e ratto è riportata; tuttavia, si consiglia l'allineamento della sequenza dell'epitopo intorno alla S724 per confermare la conservazione in queste specie.
• Essendo un anticorpo policlonale di coniglio, le prestazioni possono variare tra lotti. Convalidare ogni nuovo lotto nel vostro sistema di analisi specifico per garantire la coerenza.

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