Phospho-MAP2K4-T261 Rabbit pAb - P45985

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della MAP2K4

• MAP2K4 (nota anche come MEK4, MKK4, SEK1, JNKK1, tra gli altri alias) è una proteina chinasi a doppia specificità che funge da componente chiave della cascata di segnalazione delle chinasi proteiche attivate da mitogeni (MAP).
• È una chinasi essenziale nella via delle chinasi proteiche attivate dallo stress/c-Jun N-terminal kinase (SAP/JNK), fosforilando e attivando direttamente le JNK (MAPK8/JNK1, MAPK9/JNK2, MAPK10/JNK3) e anche le MAPK p38 (MAPK11, MAPK12, MAPK13, MAPK14).
• MAP2K4 fosforila preferenzialmente il residuo tirosina all'interno del motivo Thr-Pro-Tyr delle JNK, mentre MAP2K7 prende di mira il residuo treonina; insieme attivano sinergicamente le JNK in risposta a vari stimoli.
• Questa chinasi è necessaria per mantenere l'omeostasi dei tessuti linfoidi periferici ed è coinvolta nella segnalazione di morte mitocondriale, inclusa il rilascio del citocromo c che porta all'apoptosi.
• La localizzazione subcellulare include sia il citoplasma che il nucleo, coerente con il suo ruolo nella trasduzione del segnale dalla superficie cellulare al nucleo.
• MAP2K4 è ampiamente espressa nei tessuti, con un'espressione particolarmente abbondante osservata nel muscolo scheletrico.
• La proteina subisce diverse modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione, metilazione e fosforilazione, che regolano la sua attività, ed è soggetta a splicing alternativo.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Essendo un anticorpo fosfo-specifico generato contro un peptide fosforilato sintetico attorno a Thr261, è fondamentale includere inibitori delle fosfatasi nei tamponi di lisi per preservare lo stato di fosforilazione della MAP2K4 endogena durante la preparazione del campione.
• Validare la specificità dell'anticorpo trattando i lisati cellulari con lambda fosfatasi; una defosforilazione di successo dovrebbe abolire il segnale se l'anticorpo riconosce rigorosamente la forma fosfo-T261.
• Per il western blotting, il peso molecolare atteso è di circa 44 kDa; utilizzare percentuali di gel adeguate e condizioni di trasferimento per questo intervallo di dimensioni.
• La reattività incrociata è prevista con umano, mouse e ratto in base all'omologia di sequenza della regione immunogenica; tuttavia, si raccomanda la verifica nella specie pertinente.
• Nelle applicazioni ELISA, considerare l'utilizzo di questo anticorpo come reagente di cattura o di rilevamento, e ottimizzare empiricamente le condizioni di rivestimento e rilevamento con standard di peptidi o proteine fosforilate.

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