mAb coniglio anti Phospho-MLKL-S345 per WB, IP, ELISA - Q9D2Y4

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della proteina simile alla chinasi a linea mista

• La proteina simile alla chinasi a linea mista (MLKL) è una pseudochinasi fondamentale per la morte cellulare per necroptosi. Può esistere una variante di splicing alternativo.
• MLKL è l'effettore terminale della necroptosi indotta da TNF. Dopo la fosforilazione da parte di RIPK3, forma omotrimeri, si trasloca verso la membrana plasmatica e innesca l'influsso di calcio e la rottura della membrana, eseguendo la necrosi programmata. Riferimenti correlati: PMID:23835476, PMID:24012422, PMID:24019532
• Nonostante il suo dominio simile a quello chinasi, MLKL non possiede attività protein-chinasi e funziona come pseudochinasi. Riferimenti correlati: PMID:24012422
• In risposta all'infezione da ortomixovirus, la MLKL nucleare può essere attivata da ZBP1 e RIPK3, portando alla rottura dell'involucro nucleare e alla fuoriuscita di DNA immunogenico nel citosol. Riferimenti correlati: PMID:32200799, PMID:32296175
• MLKL è prevalentemente citoplasmatica ma può associarsi alla membrana cellulare e al nucleo a seconda dello stato di attivazione.
• MLKL è altamente espressa nel timo, colon, intestino, fegato, milza e polmone, con livelli più bassi nel muscolo scheletrico, cuore e rene, ed è assente nel cervello.
• MLKL contiene un dominio a doppia elica e un sito di legame per l'ATP, anche se non mostra attività chinasi. È una fosfoproteina regolata da molteplici eventi di fosforilazione.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico corrispondente alla S441 della MLKL di topo; confermare la specificità dell'anticorpo trattando i campioni con lambda fosfatasi o utilizzando la competizione con peptide non fosforilato.
• Per Western blot, ci si aspetta una banda intorno ai 54 kDa. Utilizzare controlli positivi appropriati come lisati cellulari di topo trattati con stimolo necroptotico (es. TNF+ZVAD+ mimetico SMAC).
• Nell'immunoprecipitazione, si raccomanda la pre-depurazione e l'ottimizzazione del rapporto anticorpo:lisato per ridurre il segnale di fondo.
• Le prestazioni in ELISA possono dipendere dalle condizioni di coating; testare entrambi i formati ELISA diretto e sandwich.

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