Fosfo-NF-κB p105-S932 coniglio mAb per WB, ELISA - P19838

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NF-κB p105

• NFKB1 codifica la proteina precursore p105, che viene elaborata proteoliticamente per generare la subunità attiva p50 del complesso del fattore di trascrizione NF-κB (PubMed:1423592). Riferimenti correlati: PMID:1423592
• La subunità p50 si associa a RELA/p65 per formare l'eterodimero p65-p50, il complesso NF-κB più abbondante, che si lega ai siti κB (5'-GGRNNYYCC-3') nei promotori dei geni bersaglio per attivare la trascrizione (PubMed:1740106, PubMed:7830764). Riferimenti correlati: PMID:1740106, PMID:7830764
• NF-κB è un fattore di trascrizione pleiotropico centrale per la risposta immunitaria, l'infiammazione, l'apoptosi e la proliferazione cellulare, regolato dalle proteine inibitrici IκB e da stimoli diversificati.
• La proteina p105 contiene un dominio di omologia Rel N-terminale (RHD) e ripetizioni ankirina C-terminali; funziona come fattore di ritenzione citoplasmatica per i dimeri NF-κB, sequestrandoli in uno stato inattivo.
• Al ricevimento di segnali di attivazione, le chinasi IκB (IKK) fosforilano IκB, portando alla sua degradazione e al rilascio dei dimeri NF-κB, che poi si traslocano nel nucleo per modulare l'espressione genica.
• I dimeri omo-p50 agiscono come repressori trascrizionali a meno che non si associno a BCL3, evidenziando la versatilità regolatoria specifica del dimero di NF-κB.
• Le modificazioni post-traduzionali, inclusa la fosforilazione, acetilazione, ubiquitinazione e S-nitrosilazione, modulano finemente l'attività di NF-κB; la fosforilazione ai residui di serina (es. S932) è implicata nell'elaborazione e nell'attivazione di p105.
• La localizzazione subcellulare è prevalentemente citoplasmatica per p105, mentre i dimeri attivi contenenti p50 viaggiano tra citoplasma e nucleo.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico corrispondente ai residui attorno a Ser932 di NF-κB p105 umano. Per il Western blot, ci si aspetta una banda principale a circa 105 kDa (p105) e possibilmente una banda a circa 50 kDa (p50). Validare la specificità della fosforilazione trattando i lisati con fosfatasi o confrontando con un anticorpo non fosfo-specifico.
• Per le applicazioni ELISA, titolare e ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo utilizzando il peptide fosforilato o lisati cellulari stimolati. Includere appropriati passaggi di blocco per ridurre il legame non specifico.
• Data la reattività crociata dell'anticorpo con mouse e ratto, considerare l'uso di linee cellulari pertinenti (es. Jurkat, HeLa, RAW 264.7) come controlli positivi. L'induzione della segnalazione NF-κB con TNF-α, LPS o PMA/ionomicina può migliorare il rilevamento.
• Includere sempre marcatori di peso molecolare e controlli appropriati per confermare la specificità, poiché i membri della famiglia NF-κB condividono somiglianze.

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