Anticorpo monoclonale di coniglio Phospho-NF-kB p65/RelA-S536 per WB, ELISA - Q04206

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del Fattore di Trascrizione p65

• Identità proteica e formazione del complesso: Il fattore di trascrizione p65 (RELA) è una subunità chiave del complesso del fattore di trascrizione NF-kB. Forma omo- o eterodimeri con altre proteine della famiglia NF-kB/Rel; l'eterodimero RELA-NFKB1 è il più abbondante e agisce come attivatore trascrizionale.
• Ruoli biologici fondamentali: NF-kB regola una vasta gamma di processi biologici, tra cui infiammazione, immunità, differenziazione cellulare, proliferazione e apoptosi. È essenziale per l'espressione genica delle citochine nelle cellule T.
  Riferimenti correlati: PMID:15790681
• Risposta antivirale: RELA funge da fattore di trascrizione chiave nella risposta all'interferone durante l'infezione da SARS-CoV-2.
  Riferimenti correlati: PMID:33440148
• Localizzazione subcellulare e attivazione: Nelle cellule non stimolate, NF-kB è sequestrato nel citoplasma dalle proteine inibitrici I-kB. Dopo stimolazione, I-kB viene fosforilato da IKK e degradato, liberando RELA che si trasloca nel nucleo per attivare la trascrizione dei geni bersaglio.
• Fosforilazione a Ser536: La fosforilazione di RELA a Ser536 è una modifica post-traduzionale critica che ne potenzia l'attività trascrizionale, promuove la localizzazione nucleare e può modulare le interazioni con i coattivatori.
• Altre modifiche e interazioni con l'ospite: Oltre alla fosforilazione, RELA è modificato da acetilazione, metilazione, ubiquitinazione e S-nitrosilazione, e partecipa alle interazioni ospite-virus.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo è stato generato contro un fosfopeptide sintetico corrispondente alle sequenze intorno a Ser536 di RELA umano; si prevede che riconosca specificamente la forma fosforilata della proteina.
• Per il Western blotting (WB), considerare di stimolare le cellule con noti attivatori di NF-kB (es. TNF-α, LPS) per indurre la fosforilazione di Ser536. Includere inibitori delle fosfatasi nei buffer di lisi per preservare il fosfo-epitopo.
• Convalidare la specificità del segnale fosforilato confrontando campioni stimolati vs non stimolati, o trattando i lisati con fosfatasi lambda prima del WB.
• Per le applicazioni ELISA, ottimizzare le condizioni del saggio per il rilevamento della proteina fosforilata e considerare l'uso di un anticorpo di rilevamento fosfo-specifico per garantire la specificità.
• È riportato che l'anticorpo ha reattività crociata con RELA di topo e ratto; confermare la reattività con lisati appropriati di queste specie.

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