Phospho-NF-kB p65/RelA-S536 Rabbit pAb - Q04206

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NF-kB p65/RelA

• NF-kB p65/RelA è una subunità del complesso del fattore di trascrizione NF-kB, un regolatore pleiotropico presente in quasi tutti i tipi cellulari che controlla i geni coinvolti nell'infiammazione, immunità, differenziazione, crescita cellulare, tumorigenesi e apoptosi.
• La forma più abbondante di NF-kB è l'eterodimero RELA-NFKB1, che si lega ai siti del DNA kappa-B con affinità distinte; diverse combinazioni di dimeri agiscono come attivatori o repressori della trascrizione.
• Nelle cellule a riposo, NF-kB viene trattenuto nel citoplasma dagli inibitori IkB; dopo stimolazione, la fosforilazione e la degradazione di IkB liberano NF-kB, permettendo la translocazione nucleare e l'attivazione dei geni bersaglio.
• RELA subisce estese modificazioni post-traduzionali—inclusa fosforilazione, acetilazione, metilazione e ubiquitinazione—che modulano la sua attività trascrizionale, stabilità e interazioni proteiche. La fosforilazione a S536 all'interno del dominio di transattivazione potenzia l'output trascrizionale.
• Essenziale per l'espressione dei geni delle citochine nelle cellule T, fungendo da ponte tra le risposte immunitarie innate e adattative. Riferimenti correlati: PMID:15790681
• Un fattore di trascrizione chiave che regola la risposta all'interferone durante l'infezione da SARS-CoV-2, sottolineando il suo ruolo nell'immunità innata antivirale. Riferimenti correlati: PMID:33440148
• La localizzazione subcellulare si sposta dinamicamente tra il nucleo e il citoplasma, regolata da segnali di localizzazione nucleare e interazioni con IkB.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Utilizzare inibitori delle fosfatasi nei tamponi di lisi e incubazione per preservare l'epitopo fosforilato S536 ed evitare la perdita di segnale.
• Includere sempre un anticorpo totale NF-kB p65 come controllo di carico e normalizzazione negli esperimenti di western blot per confermare le modifiche specifiche di fosforilazione.
• Per IHC-P, ottimizzare il recupero dell'antigene e bloccare le perossidasi endogene; considerare il trattamento delle sezioni con fosfatasi per verificare la colorazione fosfo-specifica.
• Nelle applicazioni ELISA, determinare empiricamente le diluizioni ottimali dell'anticorpo e le condizioni di rilevamento per ogni formato di saggio.

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