Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-NF-κB p65/RelA (Ser468) per WB, ELISA - Q04206

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NF-κB p65/RelA

• NF-κB p65 (noto anche come RelA, NFKB3) è una subunità del complesso del fattore di trascrizione NF-κB, appartenente alla famiglia di proteine contenenti il dominio di omologia Rel che include RELA, RELB, REL, NFKB1/p105 e NFKB2/p52.
• L'eterodimero canonico NF-κB RELA-NFKB1 si lega ai siti DNA κB per attivare geni coinvolti nell'infiammazione, immunità, crescita cellulare, differenziazione e apoptosi.
• p65/RelA forma sia eterodimeri attivanti (es. RELA-NFKB1) che omodimeri (RELA-RELA), questi ultimi coinvolti nell'espressione di IL-8 mediata da invasina.
• La localizzazione subcellulare è principalmente citoplasmatica in uno stato inattivo legata agli inibitori IκB; dopo l'attivazione, si transloca nel nucleo per regolare la trascrizione.
• p65 è soggetta a estese modificazioni post-traduzionali tra cui fosforilazione, acetilazione, metilazione, ubiquitinazione e S-nitrosilazione, che modulano la sua attività e stabilità.
• La fosforilazione a Ser468 (e altri residui) è implicata nella regolazione fine dell'attività trascrizionale e delle interazioni proteiche.
• RelA è essenziale per l'espressione dei geni delle citochine delle cellule T. Riferimenti correlati: PMID:15790681
• Agisce come fattore di trascrizione chiave nella risposta all'interferone durante l'infezione da SARS-CoV-2. Riferimenti correlati: PMID:33440148

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo è prodotto contro un peptide fosforilato sintetico attorno a Ser468; pertanto, riconosce specificamente la forma fosforilata di p65/RelA. Per un rilevamento accurato, includere inibitori delle fosfatasi nei buffer di lisi e lavaggio.
• Per confermare la fosfo-specificità, trattare i campioni con lambda fosfatasi proteica e confrontare i segnali delle bande tramite WB; una perdita di segnale indica la dipendenza dalla fosforilazione.
• Per WB, eseguire SDS-PAGE in condizioni riducenti e utilizzare controlli appropriati (es. lisati cellulari non trattati vs stimolati noti per attivare NF-κB).
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o rilevamento; validare l'abbinamento con un anticorpo p65 non fosfo-specifico per ELISA a sandwich.
• Considerare la reattività crociata con campioni di ratto come indicato; tuttavia, validare nel proprio modello sperimentale specifico.

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