Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-NFKB1 (S337) per WB, ELISA - P19838

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NFKB1

• NFKB1 codifica il precursore p105, che subisce elaborazione mediata dal proteasoma co- e post-traduzionale per generare la subunità attiva p50. p50 forma omodimeri o eterodimeri con altri membri della famiglia NF-κB (RELA, RELB, REL, NFKB2). Riferimenti correlati: PMID:1423592
• L'eterodimero p65-p50 è il complesso NF-κB più abbondante e agisce come attivatore trascrizionale legandosi ai siti consenso κB (5′-GGRNNYYCC-3′) nei potenziatori dei geni della risposta immunitaria e di fase acuta. Riferimenti correlati: PMID:1740106 PMID:7830764
• L'omodimero p50-p50 funge da repressore trascrizionale ma può passare ad attivatore quando associato a BCL3. NFKB1 p105 trattiene anche le proteine NF-κB nel citoplasma, controllando così la loro translocazione nucleare.
• La segnalazione NF-κB è strettamente regolata da modifiche post-traduzionali, inclusa fosforilazione, acetilazione, S-nitrosilazione e ubiquitinazione. NFKB1 è una fosfoproteina; gli eventi di fosforilazione modulano la sua stabilità, elaborazione e attività trascrizionale.
• NFKB1 è ampiamente espresso, in particolare nelle cellule immunitarie, e svolge un ruolo centrale nell'infiammazione, immunità, apoptosi e proliferazione cellulare.
• La proteina si localizza principalmente nel citoplasma nelle cellule a riposo. Dopo l'attivazione e la degradazione degli inibitori IκB, i dimeri liberati si traslocano nel nucleo per indurre l'espressione dei geni bersaglio.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico fosforilato attorno a S337 di NFKB1 umano. Per preservare il segnale di fosforilazione durante la preparazione del campione, includere inibitori delle fosfatasi nei tamponi di lisi ed evitare incubazioni prolungate a temperature elevate.
• Per il Western blot, prevedere bande principali a ~50 kDa (subunità p50) e ~105 kDa (precursore p105). A causa della reattività crociata con ortologhi di topo e ratto, può essere utilizzato in queste specie, ma la diluizione ottimale deve essere determinata empiricamente.
• L'anticorpo è stato validato per WB ed ELISA. Quando si esegue l'ELISA, considerare un formato a sandwich o un design di saggio competitivo, e verificare la specificità utilizzando controlli con peptide non fosforilato.
• L'attivazione NF-κB può essere indotta da una vasta gamma di stimoli (es. TNF-α, LPS, IL-1β). Ogni volta che possibile, includere controlli positivi da cellule stimolate e un campione defosforilato o trattato con fosfatasi per confermare la dipendenza dalla fosforilazione.

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