PolimAb® di coniglio contro Phospho-NFKB1-S337 per WB - P19838

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NFKB1

• NFKB1 codifica il precursore p105, che subisce un processo di maturazione mediato dal proteasoma per generare la subunità attiva p50 del complesso del fattore di trascrizione NF-κB (PubMed:1423592). Riferimenti correlati:
  PMID:1423592

• La subunità p50 forma omodimeri o eterodimeri con altri membri della famiglia NF-κB/Rel come RELA/p65, RELB e REL, legandosi alla sequenza consenso κB del DNA 5'-GGRNNYYCC-3' per regolare l'espressione genica (PubMed:1740106, PubMed:7830764). Riferimenti correlati:
  PMID:1740106
  PMID:7830764

• NF-κB è un mediatore centrale delle risposte immunitarie e infiammatorie, della crescita cellulare, della differenziazione e dell'apoptosi; l'eterodimero p65-p50 è il complesso più abbondante e trascrizionalmente attivo.

• I dimeri inattivi di NF-κB sono trattenuti nel citoplasma dagli inibitori IκB; dopo la stimolazione, IκB viene fosforilato e degradato, permettendo a NF-κB di traslocare nel nucleo e attivare i geni bersaglio.

• NFKB1 funge anche da ancoraggio di ritenzione citoplasmatica tramite p105 per le proteine NF-κB associate e, in complesso con MAP3K8, reprime la segnalazione MAPK finché la degradazione di p105 non rilascia MAP3K8 attiva.

• La proteina è soggetta a molteplici modifiche post-traduzionali tra cui fosforilazione, acetilazione, ubiquitinazione e idrossilazione, che modulano la sua attività, stabilità e localizzazione subcellulare.

• La localizzazione subcellulare include sia il citoplasma che il nucleo, riflettendo il suo duplice ruolo nel sequestro dei segnali e nella regolazione trascrizionale.

• Le isoforme alternative prodotte da splicing alternativo contribuiscono alla diversità funzionale; la proteina full-length p105 (105 kDa) e la subunità processata p50 (50 kDa) sono rilevate nella maggior parte dei tipi cellulari.

Indicazioni Sperimentali e Consigli Tecnici

• Data la natura fosfo-specifica di questo anticorpo, è fondamentale aggiungere inibitori delle fosfatasi nei buffer di lisi per preservare il segnale di fosforilazione durante la preparazione dei campioni.
• Per Western blot, si raccomanda un controllo positivo con attivazione nota della via NF-κB (es. cellule trattate con TNF-α); va verificata la rilevazione di bande intorno a 105 kDa (p105) e 50 kDa (p50).
• Nell'immunistochimica, le condizioni di recupero dell'antigene e la diluizione dell'anticorpo devono essere ottimizzate; assicurarsi che il pattern di colorazione rifletta la localizzazione nucleare/citoplasmatica prevista dopo l'attivazione della via.
• L'anticorpo è adatto per ELISA; per saggi quantitativi si consiglia di utilizzare il peptide fosforilato come standard.

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