Fosfo-p70 S6 Chinasi 1-T421/S424 coniglio mAb per WB, IF/ICC, ELISA - P23443

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RPS6KB1 (p70 S6 Chinasi 1)

• RPS6KB1 (p70 S6 chinasi 1) è una serina/treonina proteina chinasi che funge da effettore a valle chiave della via di segnalazione mTOR, regolando la crescita cellulare, la proliferazione e la sopravvivenza. Riferimenti correlati: PMID:11500364, PMID:12801526, PMID:14673156
• La chinasi viene attivata attraverso la fosforilazione multi-sito, con la fosforilazione mediata da mTORC1 a Thr-421/Ser-424 (situata nel dominio autoinibitorio) che svolge un ruolo critico nella sua attivazione. Dopo stimolazione mitogena, questa fosforilazione innesca la dissociazione dal complesso di inizio della traduzione EIF3 e la successiva attivazione della chinasi. Riferimenti correlati: PMID:16286006
• Promuove la sintesi proteica fosforilando componenti della macchinaria di traduzione, inclusi EIF4B, RPS6 ed EEF2K, e potenzia l'inizio della traduzione inattivando il repressore EIF4A PDCD4. Riferimenti correlati: PMID:11500364, PMID:12801526, PMID:14673156, PMID:17053147
• RPS6KB1 partecipa alla regolazione di feedback della segnalazione mTOR fosforilando i componenti mTORC2 MAPKAP1/SIN1 e RICTOR, nonché il componente mTORC1 DEPTOR, modulando così l'attività di AKT1. Riferimenti correlati: PMID:15899889, PMID:19720745, PMID:19935711, PMID:22017876
• Media la sopravvivenza cellulare fosforilando e inibendo la proteina pro-apoptotica BAD e regolando la dinamica del complesso mitocondriale URI1-PPP1CC. Riferimenti correlati: PMID:17936702
• A livello subcellulare, si localizza nel citoplasma, nucleo, mitocondri e membrana mitocondriale esterna, e compartimenti sinaptici, riflettendo i suoi diversi ruoli regolatori.
• La proteina è ampiamente espressa nei tessuti umani, sottolineando il suo ruolo fondamentale nell'omeostasi cellulare.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per il Western blotting, è prevista una banda di circa 59 kDa. Convalidare la specificità utilizzando lisati trattati con fosfatasi o competizione con peptide non fosforilato.
• Nell'immunofluorescenza, ottimizzare le condizioni di fissaggio e permeabilizzazione per preservare l'epitopo fosforilato; considerare di testare trattamenti di privazione di siero e stimolazione per visualizzare i cambiamenti di localizzazione dipendenti dall'attivazione.
• Per le applicazioni ELISA, rivestire con il peptide fosforilato bersaglio o utilizzare un formato a sandwich per catturare e rilevare la fosfo-p70 S6K, assicurandosi che l'anticorpo di rilevamento riconosca la fosforilazione specifica.
• Estendendo le applicazioni a campioni di topo o ratto, verificare la reattività crociata nel tessuto o linea cellulare rilevante, poiché l'omologia di sequenza può influenzare il legame.
• Il design dell'immunogeno (peptide fosforilato sintetico attorno a T421/S424) garantisce la specificità fosforilata; confermare sempre trattando i campioni con lambda fosfatasi o utilizzando un controllo con anticorpo non fosforilato.

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